Особенности взаимодействия и устойчивости к цисплатину клеток нейробластомы человека при ко-культивировании с иммунными и стромальными клетками in vitro Китаева Кристина Викторовна

Короткий опис

Китаева,КристинаВикторовна.Особенностивзаимодействияиустойчивостикцисплатинуклетокнейробластомычеловекаприко-культивированиисиммуннымиистромальнымиклеткамиinvitro: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.04 /КитаеваКристинаВикторовна; [Место защиты: ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»]. - Казань, 2022. - 166 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
«КАЗАНСКИЙ (ПРИВОЛЖСКИЙ) ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» На правах рукописиКитаеваКристинаВикторовнаОСОБЕННОСТИВЗАИМОДЕЙСТВИЯИУСТОЙЧИВОСТИКЦИСПЛАТИНУКЛЕТОКНЕЙРОБЛАСТОМЫЧЕЛОВЕКАПРИКО-КУЛЬТИВИРОВАНИИСИММУННЫМИИСТРОМАЛЬНЫМИКЛЕТКАМИINVITRO03.01.04 биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой

стр. 12
естественной опухоли. Цель работы: оценкаустойчивостикцисплатинуопухолевых,иммунныхи мезенхимных стволовых/стромальныхклетокчеловекаи ихвзаимодействияприсовместномкультивированииinvitro. Задачи исследования: 1. Продемонстрировать самоорганизациюклетокнейробластомыили аденокарциномы шейки матки, мононуклеарныхклетокпериферической крови и мезенхимных стволовых/стромальных...

стр. 12
клетокпериферической крови и мезенхимных стволовых/стромальныхклетокприко-культивированиии в присутствиицисплатина. 13 Научная новизна работы Впервые показано, что мезенхимныестромальные/стволовыеклетки, опухолевыеклеткинейробластомыиликлеткиаденокарциномы шейки матки и мононуклеарныеклеткипериферической крови самоорганизуются в кокультуре invitroи обмениваются мембранными и...

Оглавление диссертациикандидат наук Китаева Кристина Викторовна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
.1 Разнообразие онкологических заболеваний
.1.1 Нейробластома
. 1.2 Цисплатин и проблема химиорезистентности
.2 Микроокружение опухоли
.3 Роль мезенхимных стволовых/стромальных клеток в микроокружении
опухоли
.3.1 Влияние гипоксии на рекрутинг мезенхимных стволовых/стромальных
клеток опухолью
.3.2 Миграция мезенхимных стволовых/стромальных клеток к облученным
опухолям
.3.3 Факторы, опосредующие хемотаксис мезенхимных
стволовых/стромальных клеток
.3.4 Про-опухолевые свойства мезенхимных стволовых/стромальных клеток

.3.5 Противоопухолевые свойства мезенхимных стволовых/стромальных
клеток
.4 Клетки иммунной системы и микроокружение опухоли
.5 Концепция опухолевой ниши
.6 Участие внеклеточных везикул в межклеточной коммуникации клеток
микроокружения опухоли
.7 Моделирование микроокружения опухоли in vitro
.7.1 Двумерные культуры
.7.2 Камера Бойдена
.7.3 Трехмерные культуры
.7.4 Микрофлуидные системы
.7.5 3D-биопечать
1.8 Заключение по обзору литературы
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Выделение, культивирование и анализ первичных культур клеток человека
2.1.1 Мезенхимные стволовые/стромальные клетки костного мозга человека

2.1.2 Мононуклеарные клетки периферической крови человека
2.1.3 Процедура пересева клеток и криоконсервация
2.1.4 Определение иммунофенотипа первичных клеток
2.1.5 Дифференцировка мезенхимных стволовых/стромальных клеток в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях
2.2 Коммерческие культуры клеток
2.3 Получение стабильной культуры клеток нейробластомы SH-SY5Y, синтезирующих зеленый флуоресцентный белок gfp
2.3.1 Получение рекомбинантного лентивируса, кодирующего кДНК гена зеленого флуоресцентного белка
2.3.2 Вирусная трансдукция и отбор генетически модифицированных клеток

2.4 Получение ко-культуры мезенхимных стволовых/стромальных клеток,
мононуклеарных клеток периферической крови и опухолевых клеток
2.4.1 Флуоресцентное окрашивание цитоплазматических мембран клеток витальными красителями
2.5 Обработка клеток цисплатином
2.6 Анализ пролиферативной активности клеток
2.7 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
2.8 Анализ цитокинового профиля кондиционированной среды
2.9 Получение индуцированных цитохалазином B мембранных везикул клеток нейробластомы SH-SY5Y
2.10 Микроскопия
2.10.1 Фазово-контрастная и флуоресцентная микроскопия
2.10.2 Лазерная конфокальная микроскопия
2.11 Цитофлуориметрический анализ
2.11.1 Подготовка образцов для цитофлуориметрического анализа
2.11.2 Проточная цитофлуориметрия и сортировка клеток
2.11.3 Проточная цитофлуориметрия с визуализацией изображения
2.12 Статистический анализ
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Мезенхимные стволовые/стромальные клетки, опухолевые клетки и мононуклеарные клетки периферической крови взаимодействуют в ко-культуре с помощью везикулярного транспорта и обмениваются мембранными и цитоплазматическими компонентами
3.1.1 Иммунофенотипирование и направленная дифференцировка мезенхимных стволовых/стромальных клеток
3.1.2 Иммунофенотипирование мононуклеарных клеток периферической крови
3.1.3 Анализ взаимодействия мезенхимных стволовых/стромальных клеток, опухолевых клеток и мононуклеарных клеток периферической крови в ко-культуре
3.2 Ко-культивирование приводит к изменению цитокинового профиля мезенхимных стромальных/стволовых клеток, опухолевых клеток и мононуклеарных клеток периферической крови
3.2.1 Культивирование клеток на пластике в течение 24 часов
3.2.2 Культивирование клеток на Матригеле в течение 24 часов
3.2.3 Культивирование клеток на пластике в течение 48 часов
3.2.4 Культивирование клеток на Матригеле в течение 48 часов
3.2.5 Культивирование клеток на пластике в течение 72 часов
3.2.6 Культивирование клеток на Матригеле в течение 72 часов
3.3 Совместная культура мезенхимных стромальных/стволовых клеток, опухолевых и иммунных клеток обладает более высокой устойчивостью к
цитотоксическому действию цисплатина, чем ко-культура мезенхимных
стромальных/стволовых и опухолевых клеток
3.3.1 Анализ пролиферативной активности/жизнеспособности клеток ко-культуры
3.3.2 Анализ относительного уровня мРНК генов BCL2, BCL2L1, BAX, CASP3, CAVIA, CAV1B и RAC1 в клетках двойной ко-культуры
3.3.3 Анализ относительного уровня мРНК генов BCL2, BCL2L1, BAX,
CASP3, CAVIA, CAV1B и RAC1 в клетках тройной ко-культуры
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ