Программируемая клеточная смерть дрожжей Saccharomyces cerevisiae, вызванная половым феромоном

Короткий опис

СодержаниеОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ...8ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫГлава 1. Феномен программируемой клеточной смерти...11Характерные признаки апоптоза...11Функции апоптоза у многоклеточных...13Компоненты каскада самоубийства...14Роль митохондрий в апоптозе многоклеточных...16Терминология типов клеточной смерти...18Апоптотические домены и механизмы апоптоза в разных систематических группах...19Глава 2. Запрограммированная гибель одноклеточныхорганизмов...22Инфузории...23Паразитиеские кинетопластиды...24Слизевики...25Одноклеточные автотрофы...26Архемонады...26Дрожжи...27Глава 3. Молекулярные механизмы программируемой клеточнойсмерти дрожжей...34Дрожжевая метакасп аза...34Протеаза Omi...35AIF...36Роль митохондрий в программируемой клеточной смертидрожжей...37Неспецифическая митохондриальная пора дрожжей...41Глава 4. Феромонный каскад дрожжей...42Биология дрожжей...42Клеточный ответ на половой феромон...44Гибель клеток S. cerevisiae, вызванная а-фактором...47Глава 5. Кальций в дрожжах...48Методы измерения внутриклеточного кальция в S. cerevisiae...48Поддержание кальциевого гомеостаза в S. cerevisiae...50Амиодарон...52Глава 6. Особенности митохондрий пекарских дрожжей...53Глава 7. Активные формы кислорода...56Особенности образования и детоксикации АФКу дрожжей S.cerevisiae...58МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯГлава 1. Культивирование дрожжей...63Генотипы использованных штаммов дрожжей...63Приготовление среды для культивации...63Условия культивации...64Глава 2. Тесты на выживание дрожжей...66Индукция ПКС...66Оценка выживаемости по количеству КОЕ...66Микроскопические методы...67Глава 3. Синхронизация культуры дрожжей...68Глава 4. Методы флуоресцентной микроскопии...68Окрашивание клеток на АФК...68Окрашивание клеток на митохондрии...69Окрашивание клеток на Са2+...70Окрашивание клеток на ДНК*...70Определение репликативного возраста клеток...70Глава 5. Выделение митохондрий из Saccharomyces cerevisiae иизмерение скорости поглощения кислорода...71Глава 6. Молекулярно биологические методы...72Выделение плазмидной ДНК из E.coliна колонках Qiagen miniprep kit...72Выделение геномной ДНК дрожжей...73Расщепление и лидирование ДНК дрожжей...73Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях...74Трансформация клеток E.coli методом электропорации...74Интегративная трансформация дрожжей...74Получение мутантных линий с полностьюинактивированным геном...75Глава 7. Список использованных реактивов...77РЕЗУЛЬТАТЫГлава 1. Исследование модели программируемой клеточной смертидрожжей штамма W303-1B, вызванной избыткомферомона...79Глава 2. Исследование ПКС, индуцированный высокой концентрациейферомона на линии клеток W303-1B cmd1-6...82Глава 3. Влияние ингибиторов и антиоксидантов на ПКС клеток W303-1Bcmd1-6...88Глава 4. Скрининг генов, участвующих в регуляции программы самоубийства Saccharomyces cerevisiae, вызванного избыткомфермона...90Описание скрининга...90Результаты скрининга...95Анализ мутантов на предмет устойчивости к ПКС, вызваннойизбытком феромона...96Глава 5 Индукция программируемой клеточной смерти напромежуточных этапах...104Индукция ПКС пекарских дрожжейперекисью водорода и менадионом...104Искусственное повышение концентрации цитоплазматическогокальция...105А23187...106Амиодарон...107Глава 6. Характерные признаки апоптоза, наблюдаемые в клетках обработанных амиодароном...1134Глава 7. Гиперполяризация митохондрий, вызваннаяамиодароном...114Изменения дыхания дрожжевых клеток, вызванные амиодароном...115Глава 8. Образование АФК клетками, вызванное амиодароном...121Глава 9. Фрагментация митохондрий...126Глава 10. Исследование функции гена YSP1...128ОБСУЖДЕНИЕ...130ВЫВОДЫ...138Список работ, опубликованных по теме диссертации...139СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ...140