Разработка векторов для молекулярного клонирования с позитивной селекцией, основанных на использовании летального эффекта гена барназы Язынин, Сергей Анатольевич

Короткий опис

Язынин,СергейАнатольевич.Разработкавекторовдлямолекулярногоклонированияспозитивнойселекцией,основанныхнаиспользованиилетальногоэффектагенабарназы: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1999. - 120 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
577.113.5:577.113.4ЯЗЫНИНСЕРГЕЙАНАТОЛЬЕВИЧРазработкавекторовдлямолекулярногооснованныхгенабарназыклонированияспозитивнойселекцией, наиспользованиилетальногоэффектаС п е ц и а л ь н о с т ь 03.00.03. — м о л е к у л я р н а я б и о л о г и я ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата

стр. 19
т с я б о л ь ш о й р а з м е р в е к т о р а (5322 и.о.), о т с у т с т в и е возможностидляклонированиякрупных фрагментов Д Н К и получения одноцепочечной ДНК. 2655 2588 Рис.5. СхемавектораспозитивнойселекциейpGATA [33]. 19 Интересен использующий малымивектортоксичный — спозитивнойген,генселекциейpSCV— 1 [37], характеризующийся крысиного экстремально R4 размерами кортикостатина ( а н т и м и к р о б н о г о д...

стр. 59
осуществлялось 1.0), Power Point с for PRISMJ'^ (Version Windows 95 (Version 7.0) and Corel DRAW 6.0. 59 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 3.1.Разработкана основегенабарназывектораселекциейВекторсодержащей рМТ440 был полученгенна основе — рМТ440 спозитивнойплазмиды рМТ416, структурныйбарназыэкстрацеллюлярной р и б о н у к л е а з ы и з Bacillus amyloliquefaciens, фланкированный сигнальным п е п т и д о м PhoA под к...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Язынин, Сергей Анатольевич
СОДЕРЖАНИЕ
Список использованных сокращений
Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор
1.1. Вектора с позитивной селекцией
1.2. РНКаза барназа как фактор летальности
1.2.1. Характеристика фермента
1.2.2. Внутриклеточный ингибитор барназы — барстар
ГЛАВА 2 Материалы и методы
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение
3.1. Разработка на основе гена барназы вектора
рМТ440 с позитивной селекцией
3.1.1. Изучение влияния уровня индукции tac—промотора на выживаемость различных штаммов E.coli,
трансформированных плазмидой рМТ416
3.1.2. Клонирование с помощью плазмиды рМТ416 ПЦР— продукта,
кодирующего вариабельные регионы легкой цепи антитела к белку р24 вируса HIV— 1
3.1.3. Введение полилинкера в ген барназы и конструкция векторов рМТ438, рМТ438а и рМТ440
3.1.4. Использование вектора рМТ440 с позитивной селекцией для клонирования фрагментов чужеродной ДНК
3.2. Конструирование вектора рВа —7 с позитивной селекцией...70 3.2.1. Конструирование плазмид рВа —2, рВа — 3s и рВа —6
3.2.2. Сайт — специфический мутагенез для удаления .повторяющихся
сайтов рестрикции и конструкция вектора рВа —7
3.2.3. Использование вектора рВа —7 для клонирования фрагментов чужеродной ДНК
3.2.4. Использование вектора рВа — 7 для клонирования генов иммуноглобулинов мыши
3.3. Исследование с помощью иммуноблотинга рекомбинантной барназы и ее мутантов, продуцируемых с помощью плазмид рМТ440 и рВа-7
3.4. Характеристика вклада ряда мутаций в ферментативную активность модифицированной барназы
Заключение
ГЛАВА 4. ВЫВОДЫ
Приложение 1
Приложение 2
Приложение 3
Приложение 4
Список литературы