Транскрипция Tol плазмиды pWWO и индукция синтеза катехол-2,3-диоксигеназы у Pseudomonas putida MT-2 Кильк, Анн Хуговна

Короткий опис

Кильк,АннХуговна.ТранскрипцияTolплазмидыpWWOииндукциясинтезакатехол-2,3-диоксигеназыуPseudomonasputidaMT-2: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Тарту, 1984. - 159 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
e{'jf-d/s<fs^)( ТАРТУСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ На правах рукописиКИЛЬКАннХуговнаУДК 577.214ТРАНСКРИПЦИЯTOLПЛАЗМИДЫp W O И ИЦЦУКЦИЯСИНТЕЗАКАТЕХ0Л-2,3-ДИ0КСИГЕНАЗЫ УPSEUDOMONASHJTIDA Ма?-2 03.00.04. - Биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук '^^^<С

стр. 27
pWW55 ХУЬ pDK1 рШ)2 рШ)3 •^2 Тга+ Тга"*" Тга~ Тга" Тга" Тга"*" =pWWOR91-tolEP4-tolRP4-tolТга"*" Str^ RP4--tolEP4-tolEP4-tolEP4-tolEP4-tolTra" Sa-tolpTNl рКЛ рЕБЗЗОО pED330l pED3302 рЕБЗЗОЗ рЕВЗЗО^ ОЮЬ* IMT101 Р.putidamt-2 (PaWI) Р.putidaMT20 Р.putidaMT14 Р.putidaMT53PseudomonasРху Р.putidaHS1 Р. aeruginosa PA03 Р....

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Кильк, Анн Хуговна
СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ . б
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Периферийный катаболизм ароматических соединений у псевдомонад
1.2. Биохимическая характеристика метаболических путей, обусловленных ТОЬ плазмидами
1.2.1. Деградация толуола и его производных у штаммов Р. ри1;1с1а
1.2.2. Ферменты расщепления толуола и его производных.
1.2.2.1. Субстратная специфичность ферментов
1.2.2.2. Ключевые ферменты
1.2.2.3. Катехол-2,3-диоксигеназа
1.2.2.4. Катехол-2,3-диоксигеназа, как маркер экспрессии ТОЬ -плазмидных генов
1.3. Генетическая и молекулярно-биологическая характеристика ТОЬ плазмид
1.3.1. Общие свойства и строение ТОЬ плазмид
1.3.1.1. Изофункциональность
1.3.1.2. Температурочувствительность
1.3.1.3. Конъюгативность
1.3.1.4. Образование рекомбинантов с Е плазмидами
1.3.1.5. Устойчивость к атомарному кислороду и ультрафиолетовому облучению . '
1.3.1.6. Бензоатная элиминация
1.3.2. Физическая и генетическая структура ТОЬ плазмиды рШО .,.*.
1.4. Экспрессия тоь -плазмидных генов
1.4.1. Доминирование плазмидного пути расщепления ароматических соединений у штаммов
P. putida.
1.4.2. Генетическая регуляция активности a?OL-плазмидных генов
1.4.3. Условия экспрессии tol -плазмидных генов
1.4.4. Транскрипция генов ОЮЬ плазмидьт
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Основные препараты и реактивы
2.2. Штаммы бактерий.
2.3. Питательные среды
2.4. Условия культивирования микробов
2.5. Условия индукции плазмидных ферментов
2.6. Определение активности ферментов
2.6.1. Приготовление бесклеточного экстракта
2.6.2. Определение сухого веса бактерий
2.6.3. Определение активности К
2.6.4. Определение активности гидролазы 2ГМПА
2.6.5. Определение активности KI
2.7. Частичная очистка К
2.8. Определение синтеза белка во время индукции активности К
2.8.1. Радиоактивное мечение белков
2.8.3. Электрофорез белков в ПААГ-е
2.9. Изучение синтеза РНК во время индукции активности К
2.9.1. Включение Р-ортофосфата в клетки бактерий.
2.9.2. Включение %-урацила в лабильную РНК
2.9.3. Выделение суммарной РНК
2.9.4. Анализ препаратов суммарной РНК
2.10. Выделение TOL -плазмидоспецифической РНК
2.10.1. Иммобилизация TOL -плазмидной ДНК на сефарозе 2В
2.10.2. Очистка TOL -плазмидоспецифической
2.11. Изучение TOL -плазмидной ДНК.
2.11.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК
2.11.2. Анализ плазмидной ДНК.
2.11.3. Выделение из геля рестрикционных фрагментов плазмидной ДНК.
2.12. Гибридизация РНК-ДНК в капилляре
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ■
3.1. Изучение динамики индукции активности К230 71 3.1 Л. Определение активности К
3.1.2. Стабильность К
3.1.3. Динамика индукции активности К
3.2. Синтез белка во время индукции активности К
3.3. Синтез РНК во время индукции К
3.3.1. Изучение синтеза лабильных РНК
3.3.2. Состав РНК, синтезированной во время индукции К
3.3.3. Выделение ТОЬ -плазмидоспецифических
3.3.4. Изучение динамики синтеза ШОЬ -плазмидо специфических РНК.
3.4. Локализация активно транскрибируемых участков в геноме плазмиды рщо
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Индукция активности К
4.2. Транскрипция ТОЬ плазмиды рШО
4.3. Локализация активно-транскрибируемых регионов ТОЬ плазмиды рШТО.
5. ВЫВОДЫ