Участие секретома мезенхимных стромальных клеток в восстановлении сперматогенеза Сагарадзе Георгий Дмитриевич

Короткий опис

Сагарадзе,ГеоргийДмитриевич.Участиесекретомамезенхимныхстромальныхклетокввосстановлениисперматогенеза: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.03.01; 14.03.06 /СагарадзеГеоргийДмитриевич; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 144 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Факультет фундаментальной медицины На правах рукописи CагарадзеГеоргийДмитриевичагарадзеГеоргийДмитриевичУЧАСТИЕСЕКРЕТОМАМЕЗЕНХИМНЫХСТРОМАЛЬНЫХКЛЕТОКВВОССТАНОВЛЕНИИСПЕРМАТОГЕНЕЗА03.03.01 «Физиология» 14.03.06 «Фармакология, клиническая фармакология» диссертация на соискание ученой степени

стр. 9
стандартизации новых лекарственных препаратов на основесекретомаМСК для лечения мужского бесплодия. 9 10 Цель исследования Установитьучастиесекретомамезенхимныхстромальныхклетокввосстановленииниши сперматогониальной стволовойклетки. Задачи исследования 1. Разработать технологию получения субстанции на основесекретомаМСК человека и предложить подходы к ее стандартизации. 2. Предложить in vivo модель нарушения...

стр. 21
уровне, так и на организменном, за счет возможного привлечения нервной и эндокринной систем [49, 65]. 21 22 Стоит отметить особый типклеток, присутствующий в большинстве типов ниш стволовойклетки—стромальныеклетки.Стромальныеклеткиактивно поддерживают стволовыеклеткивзрослого организма за счет секреции

Оглавление диссертациикандидат наук Сагарадзе Георгий Дмитриевич
Список сокращений
Введение
Актуальность проблемы и степень ее разработанности
Цель исследования
Задачи исследования
Положения, выносимые на защиту
Научная новизна
Теоретическая и практическая значимость работы
Методология и методы исследования
Степень достоверности полученных результатов
Апробация работы
Публикации
Личный вклад автора
Объем и структура диссертации
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Стволовые клетки и ниша стволовой клетки
1.2. Регуляция поведения стволовых клеток в нише
1.3. МСК как ключевой компонент ниши стволовой клетки
1.3.1. Роль МСК в гомеостазе и восстановлении ниши
1.3.2. Эффекты МСК, связанные с паракринной функцией
1.4. Исследование роли МСК в восстановлении ниши ССК
1.4.1. Ниша сперматогониальной стволовой клетки (ССК)
1.4.2. Связь нарушений сперматогенеза с функцией стволовых клеток и ниши
ССК
1.4.3. Выбор модели повреждения ниши
1.5. Подходы к восстановлению сперматогенеза

2
3

1.6. Подходы к терапевтическому применению секретома МСК
1.7. Заключение к обзору литературы
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Методы выделения МСК из жировой ткани человека
2.2. Материалы и методы, используемые для получения секретома МСК
2.2.1 Получение секретома МСК
2.2.2. Концентрирование секретома МСК
2.3. Методы оценки специфической активности секретома МСК in vitro
2.3.1. Влияние секретома МСК на скорость миграции фибробластов кожи
человека
2.3.2. Влияние секретома МСК на скорость миграции клеток сосудистого
эндотелия человека
2.4. Определение концентраций белково-пептидных факторов в секретоме
МСК
2.5. Включение секретома МСК в коллагеновый гель и оценка способности
коллагенового геля к высвобождению факторов
2.6. Экспериментальные животные и модели
2.6.1. Животные
2.6.2. Моделирование нарушения сперматогенеза
2.6.3. Описание экспериментальных групп
2.6.4. Анализ концентрации тестостерона в сыворотке крови крыс
2.6.5. Оценка фертильности крыс
2.7. Анализ клеточного состава с помощью морфометрии и
иммуногистохимического анализа клеточного состава ткани яичек
2.7.1. Иммуногистохимический анализ
2.7.2. Оценка количества дифференцированных потомков сперматогониев в
семенных канальцах
2.7.3. Морфометрический анализ содержимого придатков яичек

3
4

2.7.4. Оценка количества клеток Сертоли
2.7.5. Оценка количества клеток Лейдига
2.7.6. Оценка количества сосудов в семенных канальцах
2.8. Выделение клеток из яичек крыс и постановка in vitro экспериментов с
ними
2.8.1. Выделение клеток из яичек крыс
2.8.1.1. Выделение культуры клеток Лейдига
2.8.1.2. Выделение культур клеток Сертоли
2.8.2. Получение секретома клеток Лейдига
2.8.3. Анализ скорости миграции клеток Сертоли
2.9. Статистический и регрессионный анализ
Глава 3. Результаты
3.1. Получение и характеристика секретома МСК жировой ткани человека
3.1.1. Исследование содержания факторов роста в секретоме при
кондиционировании МСК жировой ткани человека
3.1.2. Оценка специфической активности субстанции на основе секретома
МСК в экспериментах in vitro
3.1.3. Предсказание специфической активности субстанции на основе
секретома МСК с помощью регрессионного анализа
3.1.4. Включение секретома МСК в коллагеновый гель
3.2. Исследование участия секретома МСК в восстановлении ниши
сперматогониальной стволовой клетки
3.2.1. Выбор экспериментальной модели для оценки функционального
состояния ниши сперматогониальной стволовой клетки
3.2.1.1. Критерии развития нарушения сперматогенеза у модельных
животных
3.2.1.2. Критерии восстановления функционального состояния ниши
сперматогониальной стволовой клетки

4
5

3.2.2. Изучение эффектов секретома МСК при экспериментальном
крипторхизме
3.2.2.1. При введении субстанции секретома МСК восстанавливается масса
яичек животных с моделированным крипторхизмом
3.2.2.2. При введении субстанции секретома МСК уменьшается
склерозирование и атрофия семенных канальцев
3.2.2.3. При введении субстанции секретома МСК восстанавливается
сперматогенез, вызванный моделированием нарушений сперматогенеза
3.2.2.4. Обоснование периода наблюдения за влиянием введения субстанции
секретома МСК на восстановление фертильности
3.2.2.5. При введении субстанции секретома МСК восстанавливается
сперматогенез и увеличивается фертильность экспериментальных животных
по сравнению с препаратом сравнения кломифена цитратом
3.2.3. Исследование возможных механизмов действия секретома МСК при
нарушениях сперматогенеза
3.2.3.1. Ангиогенный потенциал субстанции секретома МСК не вносит вклад
в восстановление сперматогенеза
3.2.3.2. При введении субстанции на основе секретома МСК усиливается
пролиферация клеток сперматогенного эпителия
3.2.3.3. При введении субстанции на основе секретома МСК замедляется
пролиферация и стимулируется секреторная активность клеток Лейдига
3.2.3.4. При введении субстанции секретома МСК восстанавливается
количество клеток Сертоли
Глава 4. Обсуждение
Глава 5. Заключение
Выводы
Список цитируемой литературы
Благодарности

5
6