Ржавина, Екатерина Михайловна Роль простагландинового звена каскада арахидоновой кислоты в развитии ишемического повреждения сетчатки у крыс

Краткое содержание

Объект исследования. Эксперимент проводили на самцах крыс популяции Wistar массой 366,7±48,2 г в модели необратимой ишемии и 412,4±61,1 г в модели стрептозотоцин- индуцированного сахарного диабета с соблюдением регламента по работе с экспериментальными животными, определенного приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977.
Моделирование сахарного диабета. Экспериментальный сахарный диабет вызывали внутрибрюшинным введением стрептозотоцина (СТЗ) в дозе 65 мг/кг («Sigma-Aldrich»), растворенного в 0,1М натриево-цитратном буфере (pH 4,5). Контрольной группе животных вводили внутрибрюшинно аналогичную дозу натриево-цитратного буфера. Через трое суток определяли уровень глюкозы в венозной крови из хвостовой вены, при этом животных предварительно не лишали корма. Из группы животных, которым вводили стрептозотоцин, исключали крыс с уровнем глюкозы менее 15 мМ. Каждую неделю в утреннее время регистрировали уровень глюкозы в венозной крови, забранной из хвостовой вены у всех животных. В течение всего времени наблюдения животным, получившим инъекции стрептозотоцина, ежедневно вводили подкожно инсулин детемир в дозе 2 ЕД/кг. На 50-е, 58-е и 66-е сутки осуществляли эвтаназию по подгруппам обследованных животных путем введения раствора хлоралгидрата.
Моделирование необратимой ишемии. Необратимую ишемию глаза моделировали путем двусторонней перевязки внутренних сонных артерий с интервалом в 30 минут у наркотизированных хлоралгидратом (0,4 г/кг, внутрибрюшинно) крыс.
Введение блокаторов каскада арахидоновой кислоты. Введение триамцинолона (блокатор фосфолипазы А2), лорноксикама (неселективный ингибитор циклооксигеназ) или физиологического раствора осуществляли через 15 минут после двусторонней окклюзии артерий интравитреально и через 24 и 28 часов после операции - парентерально. Перед интравитреальным введением блокаторов каскада арахидоновой кислоты использовали капли Мидриацил (0,5% раствор тропикамида) для расширения зрачка и улучшения обзора введенной иглы и Алкаин (0,5% раствор проксиметакаина) для местного обезболивания. До и после инъекции глаз обрабатывали каплями Витабакт (0,05% раствор пиклоксидина), противомикробным препаратом. Триамцинолон (40 мг/кг) и лорноксикам (8 мг/кг) или физиологический раствор вводили интравитреально в объеме 2 мкл. Иглу вводили вблизи бифуркации вортикозной вены под углом 40° под визуальным контролем. Парентеральные дозы препаратов, рассчитанные на основании веса животного, составили для лорноксикама - 230 мкг/кг, для триамцинолона - 571 мкг/кг. Физиологический раствор вводили аналогично в объеме 0,5 мл/кг.
Морфологический анализ сетчатки. После энуклеации глаза фиксировали в оригинальным фиксаторе Дэвидсона в течение 24 часов, после чего материал обрабатывали в серии спиртов и заключали в парафиновые блоки по стандартной методике. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. На срезах оценивали толщину всех слоев сетчатки в трех зонах (в центре, на экваторе и периферии сетчатки), наличие и выраженность ундулирующих изменений сетчатки и число мигрировавших ядер, окрашенных аналогично ядрам в ядерных слоях сетчатки.
Офтальмоскопическое исследование проводили на наркотизированных животных с помощью налобного бинокулярного видеоофтальмоскопа с линзой +70 Дптр. Предварительно животным для расширения зрачка закапывали в глаз Мидриацил. Отмечали развитие неперфузируемых капиллярных зон (от 0 до 8 баллов), трофику зрительного диска (в % от исходного уровня), особенности хода сосудов.