Циркулирующие внеклеточные нуклеиновые кислоты в крови здоровых доноров и онкологических больных Тамкович, Светлана Николаевна

Краткое описание

Тамкович,СветланаНиколаевна.Циркулирующиевнеклеточныенуклеиновыекислотывкровиздоровыхдоноровионкологическихбольных: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Новосибирск, 2005. - 156 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
61:06-3/399 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ БИОЛОГИИ И ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ На правах рукописиТамковичСветланаНиколаевнаЦиркулирующиевнеклеточныенуклеиновыекислотывкровиздоровыхдоноровионкологическихбольных03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание

стр. 2
Механизмы, приводящие к появлению вкровициркулирующихнуклеиновыхкислот1.2.1. Апоптоз и некроз как - возможиые источники появлениявнеклеточныхнуклеиновыхкислотвкрови1.2.2. Активная секрециянуклеиновыхкислотвовнеклеточнуюсреду 40 42 44 1.3. Биологическая рольвнеклеточныхнуклеиновыхкислотвкрови1.4. Использованиевнеклеточныхнуклеиновыхкислот...

стр. 4
флуоресцентных красителей Hoechst 33258 и SYBR Green II 3.3. Влияние метода сборакровии хранения образцов на концентрацию виеклеточныхнуклеиновыхкислот3.4. Свободные и связанные с поверхностью клетоквнеклеточныенуклеиновыекислотывкровиздоровыхдоноров3.5. Особенности циркуляциивнеклеточныхнуклеиновыхкислотубольныхс доброкачественными и злокачественными опухолями молочной железы 3.6....

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Тамкович, Светлана Николаевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Особенности циркуляции внеклеточных нуклеиновых кислот 9 крови
1.1.1. Методологические подходы к исследованию концентрации 9 циркулирующей ДНК в плазме крови в норме и при патологии
1.1.2. Форма циркуляции и особенности строения внеклеточных
• дезоксирибонуклеиновых кислот крови
1.1.3. Методологические подходы к исследованию концентрации 27 циркулирующей РНК в плазме крови в норме и при патологии
1.1.4. Форма циркуляции и особенности строения внеклеточных 30 рибонуклеиновых кислот крови
1.1.5. Факторы, влияющие на циркуляцию нуклеиновых кислот в крови
1.1.5.1. Влияние нуклеаз на циркуляцию нуклеиновых кислот в крови
1.1.5.2. Влияние протеаз на циркуляцию нуклеиновых кислот в крови 36 щ 1.2. Механизмы, приводящие к появлению в крови циркулирующих нуклеиновых кислот
1.2.1. Апоптоз и некроз как - возможные источники появления внеклеточных 42 нуклеиновых кислот в крови
1.2.2. Активная секреция нуклеиновых кислот во внеклеточную среду
1.3. Биологическая роль внеклеточных нуклеиновых кислот в крови
1.4. Использование внеклеточных нуклеиновых кислот крови в практической медицине
I ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Реактивы и препараты
2.1.2. Лабораторные животные
2.1.3. Образцы крови 59 ^ 2.1.4. Оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Приготовление Р меченых фрагментов ДНК
2.2.2. Методы выделения ДНК из плазмы крови
2.2.2.1. Выделение ДНК методом фенольпой очистки
2.2.2.2.Метод выделения ДНК после осаждения комплексов белков с SDS
2.2.2.3. Метод выделения ДНК осаждением комплексов белков с SDS и 62 осаждения полисахаридов обработкой перхлоратом натрия
2.2.2.4. Метод выделения ДНК осаждением комплексов белков с SDS и осаждения 62 полисахаридов обработкой перхлоратом натрия, с последующей экстракцией липидов смесью хлороформ : изоамиловый спирт
2.2.2.5. Метод сорбции ДНК на стеклянные частицы
2.2.2.6. Метод сорбции ДНК на модифицированном стекле
2.2.3. Культивирование клеток
2.2.4. Методы выделения РНК из мембранно-цитозольной фракции клеток 64 линии А
2.2.4.1. Метод фенольпой экстракции
2.2.4.2. Фенол-гуанидиновый метод
2.2.4.3. Выделение РНК при помощи модифицированнго стекла
2.2.5. Оценка эффективности выделения РНК длиной 96 н. при помощи сорбции 66 на модифицированном стекле
2.2.6. Приготовление растворов ДНК и РНК для построения калибровочных 66 кривых
2. 2.7. Взятие крови и приготовление элюатов с поверхности эритроцитов и лейкоцитов
2.2.8. Определение концентрации внеклеточных нуклеиновых кислот в плазме 68 крови и клеточных элюатах
2.2.9. Исследование размера внеклеточных нуклеиновых кислот в плазме и 69 элюатах с поверхностей клеток крови
2.2.10. Изготовление конъюгатов и иммунизация животных
2.2.11. Изготовление сорбентов и выделение антител методом аффинной 71 хроматографии
2.2.12. Выделение специфических антител
2.2.13. Изготовление конъюгатов антител с пероксидазой хрена
2.2.14. Определение протеазной активности при помощи иммуноферментного 75 анализа
2.2.15. Приготовление модифицированного субстрата для определения 76 дезоксирибонуклеазной активности
2.2.16. Определение нуклеазной активности при помощи иммуноферментного 78 анализа
2.2.17. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка методов выделения и определения концентраций 80 циркулирующих нуклеиновых кислот
3.2. Определение концентрации ДНК и РНК при помощи флуоресцентных 88 красителей Hoechst 33258 и SYBR Green II
3.3. Влияние метода сбора крови и хранения образцов на концентрацию 93 внеклеточных нуклеиновых кислот
3.4. Свободные и связанные с поверхностью клеток внеклеточные нуклеиновые 97 кислоты в крови здоровых доноров
3.5. Особенности циркуляции внеклеточных нуклеиновых кислот у больных 102 с доброкачественными и злокачественными опухолями молочной железы
3.6. Исследование размера внеклеточных нуклеиновых кислот крови
3.7. Исследование факторов, влияющих на длительность циркуляции 113 внеклеточных нуклеиновых кислот
3.7.1. Исследование нуклеазной активности плазмы крови и ФБ-ЭДТА элюатов 113 здоровых доноров и больных с опухолями молочной железы
3.7.2. Определение протеазпой активности плазмы крови и ФБ-ЭДТА элюатах 119 здоровых доноров и больных с опухолями молочной железы
ВЫВОДЫ