Экспрессия клонированного гена поверхностного антигена вируса гепатита в человеке в Escherichia coli Козловская, Татьяна Минаевна

Краткое описание

Козловская,ТатьянаМинаевна.ЭкспрессияклонированногогенаповерхностногоантигенавирусагепатитавчеловекевEscherichiacoli: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Рига, 1984. - 131 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
&^:25--з///^/-3 ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОГО СИНТЕЗА АКАДЕМИИ НАУК ЛАТВИЙСКОЙ ССР На правах рукописиКОЗЛОВСКАЯТатьянаМинаевнаУДК 577.1:547.963.3ЭКСПРЕССИЯКЛОНИРОВАННОГОГЕНАПОВЕРХНОСТНОГОАНТИГЕНАВИРУСАГЕПАТИТАВЧЕЛОВЕКАВEscherichiacoli(03.00.03 - молекулярная

стр. 4
несущей 75 78 80 75 2.8. Конструирование плазмид для прямойэкспрессиигенаHBsAg 3. Иммунологическое определение синтеза HBsAg в E.coli3.1. ОпределениеэкспрессиигенаHBsAg в E.coliметодом конкурентной иммунопреципитации 3.2. ОпределениеэкспрессиигенаHBsAg в E.coliиммунопреципитацией меченого белка

стр. 124
Михай­ лов М.М., Худяков Ю.Е., Скрипкин Е.А,, Смирнов В.Д., Народицкий B.C., Кетиладзе E.G., Тихоненко Т.И. Клони­ рование иэкспрессиягена, кодирующегоповерхностныйантигенвирусагепатитаВ (HBsAg) вEscherichiacoli. - Докл. АН СССР, 1983, 268, 496-498. 105. Fujisawa Y., Ito I., Sasada R., Ono Y.,

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Козловская, Татьяна Минаевна
ВВЕДЕНИЕ.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.
1. Вирус гепатита В, его место в группе
HBV-подобиых вирусов (гепаднавирусов)
2. Структура HBV.II
2.1. Вирусные антигены .II
2.2. Структура геномной ДНК HBV.
3. Генноинженерный этап в изучении HBV.
3.1. Клонирование^, вирусной ДНК в бактериальных векторах
3.2. Первичная структура генома HBV.
4. Экспрессия гена HBsAg в бактериальных клетках
4.1. Структура HBsAg.
4.2. Иммунологические свойства HBsAg
4.3. Синтез HBsAg в бактериальных клетках
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Бактерии, плазмидные и фаговые вектора
2. Ферменты
3. Электрофорез ДНК.
4. Препаративное выделение плазмид
5. Отбор клонов, содержащих рекомбинантные ДНК
6. Скрининг рекомбинантных плазмид
7. Секвенирование ДНК.
8. Клонирование ДНК hbv.
8.1. Выделение частиц Дейна.
8.2. Получение ДНК hbv.
8.3. Клонирование ДНК hbv и отбор рекомбинантных клонов
9. Конструирование рекомбинантных плазмид
9.1. Рестрикция ДНК и выделение фрагментов
9.2. Выравнивание "липких" концов ДНК
9.3. Лигирование
9.4. Коннекторный способ конструирования рекомбинантных плазмид . ^
10. Определение бактериальных HBsAg-полипептидов методом конкурентной иммунопреципитации
11. Определение молекулярной массы бактериальных HBsAg-полипептидов иммунопреципитацией белка, меченого in vivo s-метионином
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Клонирование генома hbv.
2. Конструирование плазмид для экспрессии гена HBsAg в E.coli.
2.1. Конструирование вектора рТК
2.2. Конструирование плазмиды рСМ8, несущей гибридный ген cat-HBsAg
2.3. Конструирование плазмиды рСМ217, несущей Гибридный ген cat-HBsAg
2.4. Подстановка гибридных генов cat-HBsAg и cat-HBsAg204 под промотор триптофанового оперона E.coli
2.5. Конструирование плазмиды рКМЮ, несущей гибридный ген kan-HBsAg
2.6. Подстановка гибридного гена kan-HBsAg под промотор триптофанового оперона
E.coli 2.7. Конструирование плазмиды pLH12, несущей гибридный ген bla-HBsAg
2.8. Конструирование плазмид для прямой экспрессии гена HBsAg.
3. Иммунологическое определение синтеза
HBsAg в E.coli.
3.1. Определение экспрессии гена HBsAg в E.coli методом конкурентной иммунопреципитации
3.2. Определение экспрессии гена HBsAg в E.coli иммунопреципитацией меченого белка
3.3. Эффективность синтеза химерных белков, содержащих HBsAg
3.4. Эффективность прямой экспрессии гена
HBsAg в E.coli.
ВЫВОДЫ.