Генетический контроль биосинтеза хлорофилла b у одноклеточной зеленой водоросли Chlamydomonas reinhardtii Никулина, Карина Владимировна

Краткое описание

Никулина,КаринаВладимировна.ГенетическийконтрольбиосинтезахлорофиллаbуодноклеточнойзеленойводорослиChlamydomonasreinhardtii: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Санкт-Петербург, 1999. - 148 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
0- i ^ C ^ - j / ^ J ' - J САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ На правах рукописи УДК 575.2:581.132.1НИКУЛИНАКаринаВладимировнаГенетическийконтрольбиосинтезахлорофиллаЪ уодноклеточнойзеленойводорослиChlamydomonasreinhardtii. специальность 03. 00. 15 - Генетика Диссертация на

стр. 10
большого числа биохимических реакций, которые можно сгрушшровать Boi^yr нескольких узловых точек (Рис. 1). Путьбиосинтезахлорофиллав растительной клетке во многом бьш выяснен благодаря изучению пигментных мутантоводноклеточнойзеленойводорослиChlorella (Granick, 1967), ногенетическийконтрольэтаповбиосинтезахлорофиллаоставался неизвестным, так как гибридологический анализ у Chlorella невозможен. Генетика регуляции...

стр. 11
l - C A O , SUBl - SUB 15хлорофиллb . ^ ^ M Hхлорофиллa Рис.1Генетическийконтрольбиосинтезахлорофиллау С.reinhardtii(Reinbothe & Beinbothe, 1996; Timko, 1998). Красными буквами обозначены ядерные гены, контролирующиебиосинтезхлорофилла,зеленымихлоропластные гены. Светлые стрелки реакция

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Никулина, Карина Владимировна
ВВЕДЕНИЕ
Список сокращений, принятых в работе. РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Биосинтез хлорофилла и его генетический контроль 1. 1. 1 Биосинтез 8-аминолевулиновой кислоты
1.1.2 Серия реакций от АЛК до протопорфирина IX
1.1.3 Включение магния в молекулу протопорфирина IX
1.1.4 Серия реакций от Mg-ПП IX до протохлорофшшида 1. 1.5. Образование хлорофиллида а и хлорофилла а
1. 1. 6 Биосинтез хлорофилла Ъ
1. 1.6. 1 Образование хлорофилла Ь ш хлорофилла а
1. 1. 6. 2 Образование хлорофилла b из хлорофиллида а
1. 1. 6. 3 Образование хлорофилла Ъ из хлорофиллида Ъ
1. 1. 6. 4 Доказательство существования протохлорофиллида Ъ in vivo
1. 1. 6. 5. Образование хлорофиллида Ъ из протохлорофиллида
1. 1. 6. 6. Происхождение кислорода в молекуле хлорофилла Ъ
1. 1. 6. 7. Превращение хлорофилла b в хлорофилл а
Глава 2. Общая характеристика структуры и функций комплексов фотосинтетического аппарата, в состав которых входит ХЛ b
1.2. 1 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс ФСI
1. 2. 2 Светособирающие антенны ФС П
1. 2. 2. 1 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс ФС II
1. 2. 2. 1. 1 Структура ССКП
1. 2. 2. 1. 2 Функции ССКП
1.2.2.2 Биогенез ССКII
1. 2. 2. 3 Светособирающие комплексы СР29, СР26 и СР
1. 2. 2. 4 Светособирающий ХЛ я/Ь-белковый комплекс СР
1. 2. 3 Светособирающий ХЛ а/б/^-белковый комплекс
1. 2. 4 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс прохлорофитов
ГЛАВА 3. Мутанты высших растений и зеленых водорослей, лишенные хлорофилла Ъ
1. 3. 1 Мутанты высших растений
1.3.2 Мутанты С. гетЬагйШ
1. 3. 2. 1 Характеристика гена СВШ
1. 3. 2. 2 Влияние ядерных и хлоропластных генов, контролирующих биогенез хлоропласта, на проявление мутантной аллели сЬп1
1. 3. 2. 3 Характеристика гена С АО
ГЛАВА. 4 Зеленая водоросль С. геткаМШ -модельный объект генетики фотосинтеза
РАЗДЕЛ 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2. 1 Исходный генетический материал 2. 2 Условия культивирования штаммов 2. 3 Проведение опытов по мутагенезу 2. 4 Гибридологический анализ
2. 4. 1 Постановка скрещиваний
2. 4. 2 Тетрадный анализ
2. 4. 3 Метод случайной выборки зооспор
2. 4. 4. Определение типа спаривания
2. 4. 5 Получения вегетативных диплоидных клеток
2. 5 Определения объема клеток
2. 6 Метод реплик
2. 7 Регистрации фенотипических признаков по уровню флуоресценции
2. 8 Флуоресцентный анализ
2. 9 Методы выделения и анализа пигментов
2. 9. 1 Экстракция пигментов
2. 9. 2 Анализ пигментов методом ВЭЖХ
2. 9. 3 Спектрофотометрический анализ пигментов
2. 9. 4 Расчет содержания пигментов
2. 9. 5 Разделение пигментов методом тонкослойной хроматографии 2. 10 Выделение и анализ белков ССКII
2. 11 Выделение и анализ светособирающих комплексов ФС
2. 12 Подготовка и проведение трансформации
2. 12. 1 Характеристика плазм иды
2. 12. 2 Выделение плазмидной ДНК
2. 12. 3 Приготовление автолизина
2. 12. 4 Протокол трансформации
2. 13 Определение содержания тотальной ДНК у диплоидных клеток 2. 14 Выделение и анализ РНК 2. 14. 1 Выделение тотальной РНК 2. 14. 2 Нозерн-блот-гибридизация
2. 15 Статистические методы
РАЗДЕЛ 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Получение ревертантов от мутантов, лишенных ХЛ b
3. 1. 1 Скрининг Петергофской генетической коллекции 3. 1. 2 Индукция ревертантов от мутантов по гену CBN
3. 1. 3 Спонтанное ревертирование мутантов по гену CBN1 3. 2 Фенотипическое описание ревертантов 3. 2. 1 Изучение пигментного состава
3. 2. 2 Изучение переноса энергии между хлорофиллами а и b 3. 2. 3 Анализ белков хлорофилл я/Ь-белкового светособирающего комплекса второй фотосистемы у различных штаммов С. reinhardtii 3. 2.4 Восстановление хлорофилл a/6-белкового светособирающего комплекса второй фотосистемы у ревертанта cbnl-48 sub9 3. 3 Гибридологический анализ ревертантов 3. 3. 1 Характер наследования реверсий
3.3.2 Обнаружение супрессорных мутаций
3.3.3 Изучение аллельной специфичности супрессии
3.3.4 Самостоятельный фенотипический эффект супрессорных мутаций
3. 4. Анализ содержания мРНК CAO гена в различных штаммах С. reinhardtii
3.5. Трансформация вегетативных диплоидных клеток С. reinhardtii
5 3. 5.1 Получение вегетативных диплоидов, несущих пигментные мутации в гетерозиготном состоянии
3. 5. 2 Выбор плазмиды для трансформации
3. 5. 3 Выбор концентрации антибиотика зеомицина для экспериментов по трансформации диплоидов С. геткаг(1Ш
3.5.4 Выбор оптимального времени воздействия автолизина на диплоидные клетки С. гетЬагс1Ш
3. 5. 5 Получение ядерных трансформантов
3. 6 Результаты инсерционного мутагенеза