Генетический контроль чувствительности про- и эукариотических микроорганизмов к мутагенным аналогам пуринов Степченкова, Елена Игоревна

Краткое описание

Степченкова,ЕленаИгоревна.Генетическийконтрольчувствительностипро-иэукариотическихмикроорганизмовкмутагенныманалогампуринов: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Санкт-Петербург, 2006. - 147 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
САНКТ-НЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ 61:06-3/947 На правах рукописиСтепченковаЕленаИгоревнаГЕНЕТИЧЕСЮШКОНТРОЛЬЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИПРО- И ЭУКАРИ0ТР1ЧЕСКИХМИКРООРГАНИЗМОВКМУТАГЕННЫМАНАЛОГАМПУРИНОВСпециальность 03.00.15 - генетика Диссертация на соискание ученой стенени кандидата биологических

стр. 2
1.1.2.Мутагенныеаналогипуринов. Механизм действиямутагенныхпредшественников ДНК 1.1.3. 6-гидроксиламинопурин 1.2. Использование функциональной геномики для масштабного поиска генов, контролирующихчувствительностьмодельныхмикроорганизмовЕ. coliuS. cerevisiae к различным мутагенам 1.3.Постановка

стр. 4
ОБСУЖДЕНИЕ 4.1.ГенетическийконтрольчувствительностиЕ. соИ кмутагенномуи токсичному действию ГАП 4. 2.Генетическийконтрольчувствительностидрожжей S. cerevisiae кмутагенномуи токсичному действию ГАП 4. 3. СравнениегенетическогоконтроляГАП-индуцированного мутагенеза у бактерий Е. coli и

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Степченкова, Елена Игоревна
СПИСОК ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
• ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Предшественники ДНК и их мутагенные аналоги.
1.1.1. Метаболизм пуринов. Сравнительная характеристика метаболизма пуринов у Е. coli и S. cerevisiae.
1.1.1.1.Биосинтез пуриновых нуклеотидов de novo.
1.1.1.2.Утилизация и взаимопревращение пуринов.
1.1.2. Мутагенные аналоги пуринов. Механизм действия мутагенных предшественников ДНК.
1.1.3. 6-гидроксиламинопурин.
1.2. Использование функциональной геномики для масштабного поиска генов, контролирующих чувствительность модельных микроорганизмов
Е. coli и S. cerevisiae к различным мутагенам.
1.3.Постановка задачи.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Штаммы и плазмиды, использованные в работе.
2.1.1. Штаммы бактерий.
2.1.2. Штаммы дрожжей.
2.1.3. Плазмиды.
2.2. Среды и условия культивирования. ф 2.3. Реактивы.
2.4. Методы генетики микроорганизмов.
2.4.1. Бактерии.
2.4.1.1. Стандартные генетические методы.
2.4.1.2. Качественный тест на токсичное и мутагенное действие аналогов.
2.4.1.3. Количественный тест на индукцию прямых мутаций в гене Rif.
2.4.1.4. Тестирование штаммов на чувствительность к хлорату калия.
2.4.1.5. Создание геномной библиотеки инсерционных мутантов
Е. coli.
2.4.1.6. Анализ бактериальных геномных библиотек с целью выявления генов, контролирующих чувствительность к ГАП.
2.4.2. Дрожжи.
2.4.2.1. Стандартные генетические методы.
2.4.2.2. Получение штаммов дрожжей.
2.4.2.3. Тестирование мутагенной активности аналогов оснований.
2.4.2.4. Тестирование чувствительности клеток дрожжей к токсичному действию ЭМС и УФ-света.
2.4.2.5. Геномный скрининг с использованием дрожжевой библиотеки делеционных мутантов для поиска штаммов, чувствительных к ГАП.
2.5. Молекулярно-генетические методы.
2.5.1. Стандартные молекулярно-генетические методы.
2.5.2. Идентификация места инсерции транспозона EZ-Tn5™ <oriV/KAN-2> в хромосоме Е. coli.
2.6. Статистические методы.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Поиск генов, контролирующих чувствительность к ГАП у бактерий
Е. coli.
3.1.1. Создание и анализ случайных геномных библиотек инсерционных мутантов Е. coli.
3.1.2. Результаты скрининга геномных библиотек случайных инсерционных мутантов у бактерий.
3.1.2.1. Гены, инактивация которых приводит к повышению чувствиельности клеток к ГАП.
3.1.2.2. Ген YhhP принадлежит МоКо-зависимому пути детоксикации ГАП.
3.1.2.3. Ген Fre контролирует новый МоКо-независимый путь детоксиеации ГАП.
3.1.2.4. Анализ ауксотрофов.
Ф 3.1.2.5. Гены, инактивация которых приводит к супрессии ГАП5-фенотипа у мутантов усЬХ.
3.2. Геномный скрининг с целью выявления генов, контролирующих чувствительность дрожжей S. cerevisiae к ГАП.
3.2.1. Подбор условий для скрининга дрожжевой делеционной библиотеки.
3.2.2. Результаты скрининга дрожжевой библиотеки делеционных мутантов.
3.2.3. Проверка чувствительности ГАП , мутантов идентифицированных в геномном скрининге, к действию других мутагенов.
Ф 3.3. Изучение влияния мутаций в генах ade4, adel6, adel7w. adelS на чувствительность клеток дрожжей к ГАП.
3.4. Идентификация генов, отвечающих за активацию ГАП у дрожжей.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Генетический контроль чувствительности Е. coli к мутагенному и токсичному действию ГАП.
4. 2. Генетический контроль чувствительности дрожжей S. cerevisiae к мутагенному и токсичному действию ГАП.
4. 3. Сравнение генетического контроля ГАП-индуцированного мутагенеза у бактерий Е. coli и дрожжей S. cerevisiae.
ВЫВОДЫ.