Генетический контроль метаболизма 6-гидроксиламинопурина у дрожжей Saccharomyces cerevisiae и бактерий Escherichia coli Козьмин, Станислав Геннадьевич

Краткое описание

Козьмин,СтаниславГеннадьевич.Генетическийконтрольметаболизма6-гидроксиламинопуринаудрожжейSaccharomycescerevisiaeибактерийEscherichiacoli: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Санкт-Петербург, 1999. - 140 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Я/'::) - ? • Санкт-Петербургский государственный университет На правах рукописиКозьминСтаниславГеннадьевичГЕНЕТИЧЕСКИЙКОНТРОЛЬМЕТАБОЖЗМА 6-ГИДРОКСИЛАМИНОПУРИНАУДРОЖЖЕЙSACCHAROMYCESCEREVISIAEИБАКТЕРИЙESCHERICHIACOLI03.00.15 - генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических

стр. 8
al, 1998) и микросомного окисления при участии цитохрома Р450 (Clement and Kunze, 1990). При изучениигенетическогоконтроляиндуцированного ГАП мутагенеза бьши 9 описаны две мутации, приводящие к экстремальному фенотипу - сверхчувствительности к мутагенному и летальному действию ГАП. УбактерийEscherichiacoliи Salmonella typhimurium к такому эффекту приводит деления района, соответствующего 18-19 мингенетическойкарты, обозначаемая как A(uvrB-bio),

стр. 120
// Генетика.-1986.-Т.22.-С.22352243. 13. Павлов Ю.И, Хромов-Борисов H.H.Генетическаяактивность аналогов оснований убактерийSalmonella typhimurium,EscherichiacoliидрожжейSaccharomycescerevisiaeI Генетика.-1984.-T.20, №8.-C.1270-1278. 14. Павлов Ю.И, Тарунина O.B.Дрожжикак модель для изучения

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Козьмин, Станислав Геннадьевич
СПИСОК ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Аналог 6-гидроксиламинопурин.
1.1.1. Биологическая активность 6-гидроксиламинопурина.
1.1.2. Возможные способы образования ГАП in vivo.
1.1.3. Влияние систем репарации и репликации на чувствительность клетки к мутагенному действию 6-гидроксиламинопурина.
1.2. Метаболизм пуринов у Е. coli и S. cerevisiae.
1.2.1. Биосинтез пуринов de novo.
1.2.1.1. Сравнительная характеристика биосинтеза ИМФ de novo у Е. coli и S. cerevisiae.
1.2.1.2. Репрессия биосинтеза de novo экзогенными пуринами.
1.2.2. Биосинтез адениловых и гуаниловых нуклеотидов из ИМФ.
1.2.3. Ферменты, участвующие в утилизации и взаимопревращении пуринов.
1.2.4. Основные способы утилизации пуринов.
1.3. Постановка задачи.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Штаммы и плазмиды, использованные в работе.
2.1.1. Штаммы дрожжей.
2.1.2. Штаммы бактерий.
2.1.3. Бактериофаги.
2.1.4. Плазмиды.
2.1.4.1. Исходные плазмиды.
2.1.4.2. Плазмиды, полученные в ходе выполнения работы.
2.2. Среды и условия культивирования.
2.3. Аналоги оснований.
2.4. Генетические и микробиологические методы.
2.4.1. Дрожжи.
2.4.1.1. Стандартные генетические методики.
2.4.1.2. Качественный тест на индукцию прямых мутаций устойчивости к канаванину или адипату.
2.4.1.3. Определение частот спонтанных мутантов, устойчивых к канаванину.
2.4.1.4. Индукция промотора гена PHÖ5.
2.4.1.5. Проверка способности штаммов усваивать аналоги пуринов.
2.4.2. Бактерии.
2.4.2.1. Стандартные генетические методики.
2.4.2.2. Качественный тест на токсичное действие аналогов.
2.4.2.3. Оценка токсичного действия аналогов по количеству выживших клеток с помощью измерения оптических рассеяний культур.
2.4.2.4. Количественный тест на индукцию прямых мутаций в гене Rif.
2.4.2.5. Метод локального мутагенеза.
2.4.2.6. Тестирование штаммов на чувствительность к хлорату калия.
2.5. Молекулярно-генетические методы.
2.5.1. Стандартные молекулярно-генетические методы.
2.5.2. Проверка дизрупций гена НАМ1 блот-гибридизацией по Саузерну.
2.5.3. Амплификация гена НатА (о197). Амплификация и секвенирование му тантных аллелей гена Мое А.
2.6. Биохимические методы.
2.6.1. Приготовление проб для электрофореза белков.
2.6.2. Электрофорез белков.
2.6.3. Тестирование аденинаминогидролазы in vivo.
2.6.4. Приготовление дрожжевых экстрактов.
2.6.5. Тестирование аминогидролазной активности в клеточных экстрактах.
2.6.6. Тестирование 5'-нуклеотидазной активности в клеточных экстрактах.
2.7. Статистические методы.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Изучение метаболизма 6-гидроксиламинопурина и выяснение функции белка Hamlp.
3.1.1. Спонтанная мутабильность штаммов дрожжей с нулевой аллелью гена НАМ1.
3.1.2. Основной путь утилизации 6-замещенных аналогов аденина у дрожжей-сахаромицетов. Влияние мутации ham 1 на способность клетки усваивать аналоги аденина.
3.1.3. Дезаминирование in vivo аденина и 6-гидроксиламинопурина при участии дрожжевой аденинаминогидролазы у штаммов дикого типа и мутантов haml.
3.1.4. Влияние мутаций по генам утилизации пуринов на чувствительность дрожжевой клетки к мутагенному действию ГАП.
3.1.5. Сверхпродукция Hamlp в дрожжах. Поиск биохимической функции
Hamlp in vitro.
3.1.6. Сверхпродукция дрожжевого Hamlp в Е. coli.
3.1.7. Влияние сверхпродукции Ham 1 р на способность дрожжевой клетки утилизировать 6-гидроксиламинопурин.
3.1.8. Сверхпродукция бактериального гомолога Hamlp (HamA) в Е. coli.
3.2. Выяснение причины сверхчувствительности к аналогам оснований штаммов Е. coli, несущих делецию A(uvrB-bio).
3.2.1. Сверхчувствительность к аналогам, вызванная мутациями в гене МоеА.
3.2.2. Влияние мутаций по генам биосинтеза молибдоптерина на чувствительность бактериальной клетки к 6-гидроксиламинопурину.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Метаболизм 6-гидроксиламинопурина.
4.2. Предполагаемая роль белка Hamlp.
4.3. Роль молибдоптерин-зависимых оксидоредуктаз в детоксификации аналогов оснований.
ВЫВОДЫ.