Исследование активных центров сериновых гидролаз методом спиновых меток Дорохов, Константин Евгеньевич

Краткое описание

Дорохов,КонстантинЕвгеньевич.Исследованиеактивныхцентровсериновыхгидролазметодомспиновыхметок: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.02. - Москва, 1985. - 192 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Ш'ПШСТЕРСТВО 1'1ЕдаЩШК0л IIPOi/Il:MJ[EeiOCTM СССР Ш'Ш по ЬИОЛОГИЧЕСММ MCm-iTAIMiM Х№ЖЧЕСК1'1Х СОЕдаИЕИ'М (Ш'Ш по Б М С ) На правах рукописиДОРОХОВКонстантинЕвгеньевичУДК 577.334 ИССЛЕДОВАШ/Ш А1СТИВНЫХЦЕНТРОВСЕРИНОВЫХГИДРОЛАЗМЕТОДОМСГШНОВЫХ глЕТОК 0 3 . 0 0 . 0 2 - биофизика Д и с с е р т а

стр. 6
изучение с по­ мощью конкурент1шх спиЕ1-меченых ингибиторовактивныхцентровсериновых1.;ерментов - сС-ХТР и БуХЭ. При этом фермент-ингибиторные комплексы регистрировалиметодомоПР, а для анализа состоянияактивныхцентровиспользовали определенные по спектрагл о'ПР К фермент-ингибиторных комплексов.

стр. 18
последнего с белком. 1.5. СериноЕые гпдролазы иметоД|,спиновыхметок. СериноЕыегидролазыявляются удобнш'ЛИ объектшли для пррьмененияметодаспиповыхметок. Наличие спецжиичных фосоюнилирующих и ацилирующихметок, возмо^шость работы с очищенныгли препаратами фе£)ментов и проведенш! сравнительного

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Дорохов, Константин Евгеньевич
ВВЕДЕНИЕ. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
ГЛАВА I. НИТРОКСИЛЬНЫЕ СПИНОВЫЕ МЕТКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СЕРИКОВЫХ ЩРОЛАЗ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Спектры ЭПР нитроксильных радикалов.
1.2. Определение скоростей вращения.
1.3. Параметры, характеризующие полярность окружения.
1.4. Взаимодействие глезду парамагнитными частицами.
1.5. Сериновые гидролазы и метод спиновых меток.
1.6. сС-ХТР и холинэстеразы - общие сведения.
1.7. Изучение оС-к'ГР методом спиновых меток.
1.8. Холинэстеразы.
1.8.1. Использование ковалентно связывающихся спин-меченых ингибиторов.
1.8.2. Нековалентно связывающиеся ингибиторы.
ГЛАВА 2. МАТЕРИМЫ И МЕТ0ДД.
ГЛАВА 3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СПИН-МЕЧЕНОГО ПРОИЗВОДНОГО
ИНДОЛА С СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЪБУШНОМ.
3.1. ¡эксперименты по конкуренции.
3.2. Влияние органических растворителей.
3.3. САЧ, ковалентно модифицированный спиновои меткой.
3.4. Влияние рИ и ионной силы среды.
3.5. Температура денатурации комплекса 1-ЬСА.
3.6. Связывание антибиотиков и ингибиторов с САЧ.
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОГО ЦЕНТРА оС-ХШ0ТРИПСИ11Л.
4.1. Спектр Ы1Р комплекса ÍI-XTP.
4.2. Влияние парамагнитных катионов и анионов.
4.3. Введение спинового зонда в активным центр
Фо сфорил-химо трипси на.
4.4. Концентрационная зависимость кажущейся константы диссоциации комплекса II-XTP.Ill
4.5. Влияние органических растворителей на комплекс 11-ХТР.±
4.6. КонФормационное изменение при переходе от нейтральных к кислым значениям pH.
4.7. Взаимодействие спиновоп метки XI с трипсином.
ГЛАВА 5. ВЗAlivio,' iE . СТВКЕ СПИН-ыЕЧЕННХ ИНГИБИТОРОВ
С ЖТИВННЫ ЦЕНТРОМ БуХЭ.
5.1. Спектр оПР соединения ill в присутствии Б;уХЭ.i
5.2. Локализация радикала 111 в комплексе с БуХЭ.
5.3. Сопоставление данных ЭПР и (йергле нтатив hoij. ки не тики.
5.4. Влияние ионной силы и органического растворителя на связывание Iii с ЪуХЗ.
5.5. Расположение нитроксила 111 в углублении белковом молекулы.
5.6. Влияние pH на взаимодействие 111 с БуХЭ.
5.7. Не специфические центры связывания.
5.8. Взаимодействие нитроксила 1 с БуХЭ.
5.9. Взаимодействие нитроксила 1У с БуХЭ.
5.10. Влияние спин-меченого новокаина на активность БуХЭ.
5.11. Взаимодействие катионов парамагнитных металлов с БуХЭ.