Исследование гомологичной и негомологичной интеграции экзогенной ДНК в геном соматических клеток млекопитающих Щербакова, Ольга Глебовна

Краткое описание

Щербакова,ОльгаГлебовна.ИсследованиегомологичнойинегомологичнойинтеграцииэкзогеннойДНКвгеномсоматическихклетокмлекопитающих: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.25. - Санкт-Петербург, 1999. - 114 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ПЕТЕРБУРГСКИЙ ИНСТИТУТ ЯДЕРНОЙ ФИЗИКИ на правах рукописи У Д К 576.315.42: 57.086.12ЩЕРБАКОВАОльгаГлебовнаi^J 17^ИССЛЕДОВАНИЕГОМОЛОГИЧНОЙИНЕГОМОЛОГИЧНОЙИНТЕГРАЦИИЭКЗОГЕННОЙДНКВГЕНОМСОМАТИЧЕСКИХКЛЕТОКМЛЕКОПИТАЮЩИХ03.00.25 - клеточная биология Диссертация на соискание

стр. 4
рекомбинации всоматическихклеткахмлекопитающих. В сравнении снегомологичнойэффективностьгомологичнойинтеграцииэкзогеннойДНКв хромосомысоматическихклетокмлекопитающихна 2-3 порядка ниже (Doetschman T.et al., 1987; Hasty P. et al., 1991). О механизмахгомологичнойинегомологичнойрекомбинации и

стр. 84
позволяют предположить, что топоизомеразы, как типа I, так и типа II, вовлечены в рекомбинационный путь, ответственный занегомологичнуюинтеграциюэкзогеннойДНК вгеномсоматическихклетокмлекопитающих. 84 Таблица 3. Частотагомологичнойинегомологичнойинтеграциивектора рК/9.1 вгеномклетокР9.

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Щербакова, Ольга Глебовна
Введение.стр.
Глава 1.Обзор литературы.
1.1 События, сопряжённые с трансфекцией экзогенной ДНК в клетки млекопитающих.стр.
1.2. Поли(АДФ-рибозилирование).стр.
1.3. Роль ДНК топоизомераз в рекомбинации.стр.
1.4. Манипуляции с геномом мышей in vivo: техника "нокаута"генов, введение направленных мутаций путём гомологичной рекомбинации.стр.
1.5.1. Центральная роль белка RecA в гомологичной рекомбинации у Escherichia coli.стр.
1.5.2. RecA-подобные белки.стр.
1.6. Белок Rad51 у млекопитающих: гомолог белка RecA с множественными функциями.стр.
1.7. Репарация двунитевых разрывов в клетках млекопитающих.стр.
Глава 2. Материалы и методы.
2.1. Культура клеток.стр.
2.2. Плазмиды, использованные в работе.стр.
2.3. Получение нокаутирующих векторов различной структуры.
2.3.1. Получение однонитевой ДНК вектора pRV9.1.стр.
2.3.2. Получение фрагмента нокаутирующего вектора методом полимеразной цепной peaK4nn(PCR).стр.
2.4. Получение hprt-нокаутных клонов F9.стр.
2.5. Обработки клеток ингибиторами.стр.
2.6. Анализ частоты случайной интеграции плазмиды в клетках китайского хомячка V79.стр.
2.7. Саузерн-блот-гибридизация.стр.
2.8. Получение клонов F9, экспрессирующих белок RecA.стр.
Глава 3. Результаты и обсуждение.
3.1. Исследование рекомбинации в клетках Р9 эмбриональной тератокарциномы мыши с помощью модельной системы направленной инактивации гена .стр.
3.1.1. Анализ структуры локуса /7р^в рекомбинантных клонах.стр.
3.2. Исследование влияния ингибиторов топоизомераз и поли(АДФ-рибозилирования) на частоту гомологичной и негомологичной интеграции экзогенной ДНК в клетках Р9.стр.
3.3. Автономная репликация плазмид, содержащих фрагменты ДНК из а-полимеразного комплекса печени крысы.стр.
3.4. Использование нокаутирующих векторов различной структуры.стр.
3.5. Исследование влияния экспрессии белка КесА на частоту гомологичной рекомбинации.стр.
3.5.1. Получение трансгенных линий Р9, экспрессирующих белок 1ЧесА.стр.
3.5.2.Сравнение частоты направленной инактивации гена /7рг/ в клетках Р9 и Р9-305.стр.
Выводы.стр.