Изучение комплекса протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда Ярыгин, Денис Викторович

Краткое описание

Ярыгин,ДенисВикторович.Изучениекомплексапротеолитическихферментовиихбелковыхингибитороввгренетутовогошелкопряда: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 2000. - 163 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
м о с к о в с к и й ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ На правах рукописиЯРЫГИНДенисВикторовичИЗУЧЕНИЕКОМПЛЕКСАПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХФЕРМЕНТОВИ ИХБЕЛКОВЫХИНГИБИТОРОВВГРЕНЕТУТОВОГОШЕЛКОПРЯДА. Специальность 03.00.04 - биологическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата

стр. 3
эксперимента ИССЛЕДОВАНИЕПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХБЕЛКОВЫХКОМПЛЕКСАФЕРМЕНТОВЭНДОГЕННЫХ ИКОМПЛЕКСАИНГИБИТОРОВПЕПТИДОГИДРОЛАЗ 56протеолитического56ингибиторов62ГРЕНЫТУТОВОГОШЕЛКОПРЯДАIII. 1. Гетерогенность эндогенногокомплексагренытутовогошелкопрядаIII. 2. Гетерогенностькомплексабелковыхпептидогидролаз вгренетутовогошелкопрядаГлава IV....

стр. 108
протеиназ в деструкции запасных белков в эмбриогенезетутовогошелкопряда. 109 Глава VII.Комплексбелковыхингибиторовпапаина вгренетутовогошелкопрядаПродемонстрированная выше гетерогенностькомплексабелковыхингибиторовпротеиназгренытутовогошелкопрядапо такому параметру как оптимум рН действия,

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Ярыгин, Денис Викторович
ВВЕДЕНИЕ.
Глава I. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ И ИХ БЕЛКОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ У НАСЕКОМЫХ (обзор литературы).
I. 1. Запасные белки и протеолитические ферменты яиц насекомых.
I. 1. 1. Запасные белки - главные субстраты пептидогидролаз яиц насекомых.
I.1.2. Протеолитические ферменты яиц насекомых.
I. 2. Белковые ингибиторы протеиназ насекомых.
I. 3. Белковые ингибиторы протеиназ тутового шелкопряда.
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
II. 1. Материал.
II. 2. Получение препаратов растворимых белков из грены тутового шелкопряда.
II. 3. Выделение субклеточных фракций из грены тутового шелкопряда.
II. 4. Определение эндогенной протеолитической активности в гомогенатах и субклеточных фракциях грены тутового шелкопряда.
II. 5. Определение подклассовой принадлежности протеолитических ферментов.
II. 6. Определение активности эндогенных ингибиторов протеолитических ферментов в гомогенатах и субклеточных фракциях грены тутового шелкопряда спектрофотометрическим методом.
II. 7. Электрофоретическое фракционирование растворимых белков грены тутового шелкопряда.
II. 8. Методы выделения и очистки цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина.
II.8.1. Гель-фильтрация.
II. 8. 2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC).
II. 8. 3. Препаративное изоэлектрофокусирование цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина в слое ультродекса фирмы «1КВ».
II. 9. Изучение физико-химических характеристик протеолитических ферментов и белковых ингибиторов пептидогидролаз.
11.9.1. Определение молекулярной массы протеолитических ферментов и белковых ингибиторов протеиназ.
11.9.1.1. Определение молекулярной массы цистеиновых протеиназ и ингибиторов папаина из грены тутового шелкопряда методом гель-фильтрации.
11.9.1.2. Определение молекулярной массы цистеиновых протеиназ и ингибиторов папаина методом SDS-электрофореза в полиакриламидном геле.
II. 9.2. Изучение субстратной специфичности цистеиновых протеиназ грены тутового шелкопряда.
II.10. Статистическая обработка результатов эксперимента.
Глава III. ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСА ЭНДОГЕННЫХ
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И КОМПЛЕКСА БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ ПЕПТИДОГИДРОЛАЗ ГРЕНЫ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА.
III. 1. Гетерогенность эндогенного протеолитического комплекса грены тутового шелкопряда.
III. 2. Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов пептидогидролаз в грене тутового шелкопряда.
Глава IV. ДИНАМИКА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И ИХ БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ В ЭМБРИОГЕНЕЗЕ
ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА.
Глава V. СУБКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И ИХ БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ В ЯЙЦАХ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
Глава VI. ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОТЕИНАЗЫ С ОПТИМУМОМ рН 3,0 ИЗ ГРЕНЫ ТУТОВОГО
ШЕЛКОПРЯДА.
VI. 1. Очистка протеиназы с оптимумом рН 3,0 из грены тутового шелкопряда.
VI. 2. Определение молекулярной массы протеиназы с оптимумом рН 3,0 методами электрофореза в полиакриламидном геле и гель-фильтрации через TSKгель.
VI. 3. Определение подклассовой принадлежности протеазы с оптимумом рН 3,0 из грены тутового шелкопряда.
VI. 4. Определение субстратной специфичности цистеиновой протеиназы с оптимумом рН 3,0.
Глава VII. КОМПЛЕКС БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ ПАПАИНА В
ГРЕНЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА.
VII. 1. Определение изоэлектрических точек белковых ингибиторов папаина грены тутового шелкопряда.
VII. 2. Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов папаина из яиц тутового шелкопряда по величине молекулярных масс.
VII. 3. Определение субстратной специфичности частично очищенных ингибиторов папаина из грены тутового шелкопряда.
VII. 4. Разделение фракций ингибиторов папаина, полученных методом гель-фильтрации, с помощью изоэлектрофокусирования в слое ультродекса.
VII. 5. Определение гомогенности и молекулярной массы ингибиторов папаина методами электрофокусирования. 117 VII. 6. Выявление возможной протеиназы-мишени для эндогенных белковых ингибиторов папаина грены тутового шелкопряда.
Глава VIII. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ И БЕЛКОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ ПЕПТИДОГИДРОЛАЗ КАК МАРКЕРЫ ПРОДУКТИВНОСТИ И ЯВЛЕНИЯ ГЕТЕРОЗИСА У
ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА.
VIII. 1. Активность цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина в грене различных по продуктивности пород тутового шелкопряда.
VIII. 2. Активность цистеиновых протеиназ в грене родительских пород и гибридов тутового шелкопряда.