Изучение временной и пространственной регуляции трансляции усовершенствованными методами мРНК-трансфекции Лашкевич Ксения Александровна

Краткое описание

Лашкевич,КсенияАлександровна.ИзучениевременнойипространственнойрегуляциитрансляцииусовершенствованнымиметодамимРНК-трансфекции: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.03 /ЛашкевичКсенияАлександровна; [Место защиты: Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова]. - Москва, 2020. - 138 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописиЛашкевичКсенияАлександровнаИЗУЧЕНИЕВРЕМЕННОЙИПРОСТРАНСТВЕННОЙРЕГУЛЯЦИИТРАНСЛЯЦИИУСОВЕРШЕНСТВОВАННЫМИМЕТОДАМИмРНК-ТРАНСФЕКЦИИДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук 03.01.03 Молекулярная биология Научный руководитель: к.б.н., Дмитриев Сергей Евгеньевич

стр. 9
механизмами инициациитрансляцииметодомкраткосрочноймРНК-трансфекции; - наладитьметодприжизненного измерения люминесценции в режиме реального времени в культивируемых клетках и применить его кизучениюдинамикитрансляциирепортёрныхмРНКв норме и в условиях стрессов; - разработать и приготовить

стр. 49
паралогичные рибосомные белки могут специфически регулировать клеточные процессы, в частности, паралог-специфичнуютрансляциюлокализованных на мембране МХмРНКу дрожжей (Komili et al. 2007). 2.3.Методрепортёрных конструкций визучениирегуляциитрансляцииМетодтрансфекциикультивируемых клеток плазмидной

Оглавление диссертациикандидат наук Лашкевич Ксения Александровна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Инициация трансляции у эукариот: обзор основных механизмов
2.1.1. Классическое кэп-зависимое сканирование
2.1.2. Неканоническая инициация: 4 типа IRES элементов
2.1.3. Реинициация трансляции, «проскальзывание» рибосомы и рибосомный слайдинг
2.1.4. Другие механизмы
2.2. Основные пути регуляции трансляции у эукариот
2.2.1. Инактивация фактора eIF2
2.2.2. Инактивация компонентов комплекса eIF4F
2.2.3. мРНК-специфичная регуляция
2.3. Адресация, транспорт и локальная трансляция мРНК в клетках эукариот
2.3.1. Трансляция, ассоциированная с мембраной ЭПР
2.3.2. Трансляция, ассоциированная с внешней мембраной митохондрий
2.2.4. Особенности регуляции локализованной трансляции
2.3. Метод репортёрных конструкций в изучении регуляции трансляции
2.4. Заключение к обзору литературы
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. МАТЕРИАЛЫ
3.1.1. Реактивы и коммерческие наборы
3.1.2. Плазмидные конструкции и олигонуклеотиды
3.1.3. Буферы и растворы
3.2. МЕТОДЫ
3.2.1. Получение библиотек кДНК
3.2.2. Центрифугирование в градиенте концентрации сахарозы
3.2.3. Полимеразная цепная реакция
3.2.4. Электрофорез ДНК в агарозном геле
3.2.5. Очистка ДНК методом фенольной экстракции и осаждение
3.2.6. Молекулярное клонирование
3.2.7. Транскрипция и кэпирование мРНК
3.2.8. Электрофорез РНК в ПААГ в денатурирующих условиях
3.2.9. Культивирование клеточных культур млекопитающих
3.2.10. Трансфекция культивируемых клеток
3.2.10. Синхронизация клеток и анализ клеточного цикла
3.2.11. Трансляция в бесклеточной системе
3.2.12. Ту-принтинг
3.2.13. Создание клеточной линии с нокаутом по избранному гену
3.2.14. Электрофорез белков в ДСН-ПААГ по Лэммли
3.2.15. Вестерн-блоттинг
3.2.16. Обработка данных
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Часть I. Регуляция трансляции во времени: краткосрочные эффекты и длительная динамика
4.1.1. Разработка методологии краткосрочной мРНК-трансфекции (БЬЕЯТ)
4.1.2. Анализ эффекта клеточных стрессов на трансляцию мРНК с различными механизмами инициации трансляции
4.1.3. Трансляция безлидерной мРНК в живых клетках млекопитающих относительно устойчива к различным стрессовым условиям
4.1.4. Амикумацин А ингибирует трансляцию в эукариотической системе
4.1.5. Бластицидин 8 ингибирует стадию элонгацию трансляции в эукариотической системе
4.1.6. Разработка методологии измерения люминесценции в режиме реального времени в живых клетках
4.1.7. Длительная динамика трансляции репортёрных мРНК во время стрессов
4.1.8. Сплайсинг искусственной мРНК в трансфицированных клетках
4.2. Часть II. Регуляция трансляции в пространстве: изучение эффекта локализации на трансляцию репортёрных мРНК
4.2.1. Влияние ядерных событий на регуляцию трансляции репортёрной мРНК
4.2.2. Дизайн и создание репортёрных конструкций с разной локализацией трансляции мРНК
4.2.3. Проверка корректности и эффективности работы конструкций с разной локализацией трансляции
4.2.4. Трансфекция культивируемых клеток люциферазными репортёрами методом РЬБЯТ
4.2.5. Отсутствие существенного вклада природной 3 - НТО в наблюдаемые эффекты
4.2.6. Исследование трансляции локализованных репортёров в динамике
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ