Клонирование и характеристика новых генов нейропептидов виноградной улитки Потеряев, Дмитрий Александрович

Краткое описание

Потеряев,ДмитрийАлександрович.Клонированиеихарактеристикановыхгеновнейропептидоввинограднойулитки: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1999. - 111 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ ИМ. В.А. ЭНГЕЛЬГАРДТА На правах рукописиПотеряевДмитрийАлександровичКЛОНИРОВАНИЕИХАРАКТЕРИСТИКАНОВЫХГЕНОВНЕЙРОНЕПТИДОВВИНОГРАДНОЙУЛИТКИ03.00.03 - молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

стр. 3
Результаты и их обсуждениеКлонированиегеновнейропептидов, обладающих регион-специфичной экспрессией в ЦНСвинограднойулиткиЧасть I. GFAD, структура и функция 1. Структура белка, кодируемогогеномpreproGFAD 2. ЭкспрессиягенаpreproGFAD 3. Физиологические эффекты D-GFAD и L - G F A D 4. Природные пептиды,

стр. 61
Результаты и их обсуяедениеКлонированиегеновнейропептидов, обладающих регион-специфичной экспрессией в ЦНСвинограднойулиткиДля поиска дифференциально экспрессирующихся в ЦНСгеновбыли взяты амплифицированные с помощью ПЦР препараты тотальной кДНК из отдельных нейронов и групп нейронов. Препараты

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Потеряев, Дмитрий Александрович
Список сокращений
Введение 7 Обзор литературы
1. Структурные особенности молекул - предшественников нейропептилов
2. Процессинг полипротеинов
3. Совместное хранение и секреция пептидных котрансмиттеров
4. Сортировка нейропептилов в зависимости от типа клеток. Механизмы, регулирующие пептидный состав в больших электронплотных везикулаях
5. 1)-аминокислоты в пептидах животных д.
5.1 Краткая история вопроса
5.2 Встречаемость и разнообразие
5.3 Биосинтез пептидов, содержащих Б-аминокислоты
5.4 Значение Б-аминокислот
7. Роль нейропептидов в половом поведении моллюсков
8. Семейство педального пептида
Материалы и методы
1. Материалы
2. Выделение суммарной РНК из органов улитки
3. Радиоактивнок мечение ДНК-зонда с помощью случайной затравки
4. Полимеразная цепная реакция
5. Получение неамплифицированных (полноразмерных) библиотек кДНК ЦНС виноградной улитки
6. «Спасение» рекомбинантной плазмиды из бактериофага А2АРII
7. Выделение плазмидной ДНК
8. Приготовление делеционных мутантов клонов кДНК для секвенирования
9. Приготовление компетентных клеток Е. coli и их трансформация рекомбинантными плазмидами
10. Опрелеление нуклеотидной последовательности кДНК
11. Синтез меченых дигоксигенином РНК-зондов
12. In situ гибридизация с целыми ЦНС виноградной улитки
13. Оптическая регистрация активности идентифицированных нейронов
14. Экспрессия рекомбинантного белка HCS
15. Выделение белка с His-tag с помощью Ni2+ агарозы
16. Препаративное выделение белка с His-tag на№2+ хелатной колонке Hi-Trap с помощью FPLC
17. Детекция изменения электрофоретической подвижности HCS2 при связывании Са2+
Результаты и их обсуждение Клонирование генов нейропептидов, обладающих регион-специфичной экспрессией в
ЦНС виноградной улитки 61 Часть I. GFAD, структура и функция
1. Структура белка, кодируемого геном preproGFAD
2. Экспрессия гена preproGFAD
3. Физиологические эффекты D-GFAD и L-GFAD
4. Природные пептиды, содержащие D-аминокислоты
5. Клеточные основы сексуального поведения виноградных улиток и GFAD
6. Поведенческие эффекты GFAD
7. Иерархия поведений у виноградной улитки
8. Нейрофизиологические эффекты GFAD
9. Сосуществование GFAD и других нейропептидов и биоаминов 77 Часть II. Педальный пептид, его предшественник и экспрессия
1. Клонирование кДНК педального пептида
2. Структура белка-предшественника педального пептида Helix
3. Экспрессия гена НРер во взрослых животных
4. Экспрессия гена НРер в онтогенезе
5. Экспрессия гена НРер в периферической нервной системе
6. Экспрессия гена НРер после стрессовых воздействий
7. Связь организации предшественника Pep с его возможной функцией
8. Pep как вероятный ко-трансмиттер
9. Pep возможно играет определенную роль в развитии и пластичности нервной системы
Часть III. HCS2 как уникальный гибридный белок
1. Физиологические действие пептидов кодируемых геном HCS
2. Значение и функциональность EF-hand домена белка HCS
3. Экспрессия рекомбинантного белка HCS2 и проверка способности его EF-hand домена связывать Са