Конструирование рекомбинантного штамма Escherichia coli, продуцирующего адгезин К88 и В-субъединицу холерного токсина Войтенко, Андрей Сергеевич

Краткое описание

Войтенко,АндрейСергеевич.КонструированиерекомбинантногоштаммаEscherichiacoli,продуцирующегоадгезинК88иВ-субъединицухолерноготоксина: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.07. - Саратов, 2000. - 132 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописиВОЙТЕНКОАНДРЕЙСЕРГЕЕВИЧКОНСТРУИРОВАНИЕРЕКОМБИНАНТНОГОШТАШ1АESCHERICHIACOLI, ПРОДЬТЩРШДЕГО АДГЕЗИИ К88 И В-СУБЬЕДЙНИЦУХОЛЕРНОГОТОКСИНА. 03.00.07 - микробиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: доктор биологических наук,

стр. 5
- даль тон, килодальтон, мегадальтон LT - термолабильный энтеротоксин E.coliLT-B - В-субьединица термолабильноготоксинаЕ.соИ CT -холерныйтоксинСТ-В - В-субьединицахолерноготоксинаST - термоотабильныйтоксинE.coliЕТЕС - энтеротоксигенныештаммыЕ.соИ ЕРЕС - энтеропатогенныештаммыЕ.coliЕНЕС

стр. 92
В-субь единицыхо­ лерноготоксина2. ДИА соштаммомЕ.coliMl? 3. ДИА соштаммомЕ.coliKS138?(pK88::mini-кап) 4. ДИА соштаммомЕ.coliМ1?(рК88: :mini-kan)

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Войтенко, Андрей Сергеевич
ВОЗБУДИТЕЛЯ К0ЛИБАКТЕРИ03 А.
1.1.1. Характеристика колибактериозов.
1.1.2. Основные этапы инфекционного процесса при коли-диареях.
1.1.3. Факторы патогенности энтеротоксигенных штаммов кишечной палочки (ЕТЕС).
7 1.1.4. Иммуногенный потенциал протективных антигенов энтеротоксигенных штаммов кишечной палочки.
1.2. Средства специфической профилактики диарейных заболеваний, вызываемых энтеротоксигенными штаммами кишечной палочки.
СОВСТВЕШШ ЙССЖД01АНЙЯ
ГЛАВА £. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды.
2.2. Питательные среды и реактивы.
2.3. Методы.
2.3.1. Коньюгационные скрещивания.
2.3.2. Изучение стабильности наследования плазмид в клетках кишечной палочки методом популяцион-ного анализа.
2.3.3. Изучение плазмидного состава полученных транс-коньюгантов Е. coli.
2.3.4. Реакция маннозорезистентной гемагглютинации
МГГП А СП ivlrx HJ
5. Определение продукции В-субьединицы холерного токсина
6. Определение безвредности штаммов шашечной палочки на модели лабораторных животных.
7. Определение колонизирующей способности штаммов кишечной палочки.
8. Изучение антигенных свойств рекомбинантного штамма Е.coli М17(рК88:¡mini-kan)(р1ЕМЗ).
8. Получение адсорбированной антисыворотки к ад~ гезину K8S и В-субьединице холерного токсина
10. ДОТ-иммукоанализ..
11. Определение б сыворотке крови ишунивированных животных антител к адгезину К88 о помощью реакции агглютинации.
12. Определение антитоксических антител в сыворотке крови шяуннизированных кроликов
КОНСТРУИРОВАНИЕ ДШЛАЗМИДН0Г0 ШТАМПА КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ М1?(рК88::mini-kan)(pIEMS), СОДЕРЖАЩЕГО РЕКОМВИНАЫТНЫЕ ПЛАЗМИДЫ С КЛОНИРОВАННЫМИ ГЕНАМИ АДРЕЗИНА К88 И В-СУБЬЕДИНШЩ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА. 50 . Коньюгациошюе введение в штамм кишечной палочки М17 плазмиды рК88: :rnlnl-kan и изучение стабильности ее наследования в клетках Е.coli М17. Изучение экспрессии плазмидных генов fas в клетках созданного штамма кишечной палочки М17(рК88::mini-kan)(pIEMS) и определение оптимальных условий для биосинтеза клетками адгезина К88.
3.3. Коньюгационное введение в штамм кишечной палочки М17(рК88: :iriini-kan) плазмиды р1ЕМЗ и изучение стабильности ее наследования в клетках Е.coli
М17(рК88::mini-kan) (PIEM3).
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ И СТАБИЛЬНОСТИ НАСЛЕДОВАНИЯ ВВЕДЕННЫХ ГЕНОВ ПРОТЕКТИВНЫХ АНТИГЕНОВ - АДГ ЕВИНА К88 И В-СУБЬЕЯИНИЦЫ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА В ШТАММЕ E.coli М17(рК88::mini-kan).(рIEM3)
4.1. Определение экспрессии генов В-субьединицы холерного токсина в клетках штамма E.coli М17(рК88::mini-kan) (р1ЕМЗ).
4.2. Определение экспрессии генов адгезина К88 в клетках £.coli М17(рК88::mini-kan)(pIEM3).
4.3. Стабильность наследования плазмид рК88::mini-kan и р1ЕМЗ штаммом E.coli М17 в условиях in vitro и in vivo.
ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ, КОЛОНИЗИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ И АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ СКОНСТРУИРОВАННОГО ДИПЛАЗМИД-НОГО ШТАММА E.coli М17(рК88::mini-kan)(pIEM3). 86 5.1. Изучение безвредности штамма Е.coli М17(рК88::mini-kan) (pIEM3).
5.2. Определение колонизирующей способности штамма
Е. coli М17 (рК88::mini-kan) (pIEM3).
5.3. Изучение антигенных свойств штамма E.coli М17(рК88:: mini-kan) (pIEM3).
ОБСУЖДЕНИЕ..
ВЫВОДЫ.