Моноклональные антитела против ангиотензин-превращающего фермента для направленной доставки изотопов и генетического материала в эндотелий легких Гаврилюк, Виталий Дмитриевич

Краткое описание

Гаврилюк,ВиталийДмитриевич.Моноклональныеантителапротивангиотензин-превращающегоферментадлянаправленнойдоставкиизотоповигенетическогоматериалавэндотелийлегких: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - [Б. м.], [19--?]. - 115 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Институт Экспериментальной Кардиологии РАМНГАВРИЛЮКВИТАЛИЙДМИТРИЕВИЧМОНОКЛОНАЛЬНЫЕАНТИТЕЛАПРОТИВАНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГОФЕРМЕНТАДЛЯНАНРАВЛЕННОЙДОСТАВКИИЗОТОПОВИГЕНЕТИЧЕСКОГОМАТЕРИАЛАВЭНДОТЕЛИЙЛЕГКИХДиссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель:

стр. 2
молекулы адгезии 1САМ-1, РЕСАМ-1 1.1.3.4. Другие антигены , 1.1.4.Антитело-зависимыйнаправленныйтранспорт веществ кэндотелиюлегких.. 19 1.1.4.1. Иммуносцинтиграфия 1.1.4.2.Доставкафибринолитиков и антикоагулянтов 1.1.4.3.Доставкаантиоксидазных агентов 1.1.4.4.Доставкалипосом 1.1.5.Доставкагенетическогоматериалакэндотелиюлегких1.1.5.1. Генная терапиялегких1.1.5.2. Векторадля...

стр. 9
направленноготранспорта лекарств игенетическогоматериалавэндотелийлег'ких. 4. Продемонстрирован успешныйнаправленныйтранспортгенетическогоматериалавэндотелийлегкихin vivo. Конъюгатмоноклональныхантител9В9 с Fab фрагментомантителпротивкноб-белка аденовируса перенаправляет аденовирусный вектор кэндотелиюлегкихпосле системного введения. При этом наблюдается 20-кратное...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Гаврилюк, Виталий Дмитриевич
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 Направленный транспорт веществ.
1.1.1. Введение.
1.1.2. Легочный эндотелий как мишень для направленной доставки лекарственных веществ.
1.1.3 Эндотелиальные антигены для направленной доставки лекарств к легким.
1.1.3.1. Ангиотензин превращающий фермент (АПФ).
1.1.3.2. Тромбомодулин (ТМ).
1.1.3.3. Поверхностные молекулы адгезии ICAM-1, РЕСАМ-1.
1.1.3.4. Другие антигены.
1.1.4. Антитело-зависимый направленный транспорт веществ к эндотелию легких.
1.1.4.1. Иммуносцинтиграфия.
1.1.4.2. Доставка фибринолитиков и антикоагулянтов.
1.1.4.3. Доставка антиоксидазных агентов.
1.1.4.4. Доставка липосом.
1.1.5. Доставка генетического материала к эндотелию легких.
1.1.5.1. Генная терапия легких.
1.1.5.2. Вектора для доставки генетического материала.
1.1.5.3. Невирусные методы доставки генов.
1.1.5.4. Вирусные вектора.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Модификация моноклональных антител против АПФ.
2.1.1 Мечение моноклональных антител радиоактивными изотопами.
2.1.1.1 Мечение антител радиоактивным изотопом иода.
2.1.1.1а. Мечение иодогеном.
2.1.1.16. Мечение реактивом Болтон-Хантера (Bolton-Hunter).
2.1.1.1с. Мечение хлорамином Т на бусах (iodo-beads).
2.1.1.2 Мечение антител радиоактивным изотопом индия (ш1п).
2.1.1.3 Мечение антител радиоактивным технецием (99Тс).
2.1.2 Биотинилирование антител.
2.1.2.1. Биотинилирование антител.
2.1.2.2. Изоэлектрофокусирование антител.
2.1.3 Получение биспецифических антител.
2.1.3.1 Конъюгирование антител или Fab фрагментов через SPDP.
2.1.3.2. Получение bis-конъюгированных антител.
2.2. Биораспределение и накопление в легких экспериментальных животных моноклональных антител, их конъюгатов и модификаций.
2.2.1. Биораспределение меченных моноклональных антител в организме экспериментальных животных.
2.2.2. Изолированные перфузированные легкие.
2.2.3. Изучение распределение эндотелиальных антигенов в сосудистом русле крысы.
2.3. Создание клеточной модели АПФ-зависимого направленного транспорта.
2.3.1. Получение вектора с полной последовательностью, кодирующей АПФ.
2.3.2. Культивирование и трансфекция СНО клеток.„.
2.3.3. Определение активности ангиотензин-превращающего фермента.
2.3.4. Иммуноферментный анализ содержания АПФ на клетках (CELL ELISA).
2.3.5. Электрофорез и Вестерн-блоттинг.
2.3.6. Иммуноцитохимический анализ клеточной культуры.
2.4. Конъюгирование антител против АПФ с генетическим материалом.
2.4.1 Конъюгирование олигонуклеотидов с моноклональными антителами.
2.4.2. Конъюгирование модельной днк с антителами.
2.5. Анализ взаимодействия моноклональных антител и их конъюгатов с АПФ.
2.5.1. Радиоиммуносорбция меченых антител на АПФ иммобилизованным на пластике.
2.5.2. Иммуносорбция активности АПФ из раствора.
2.5.3. Иммуноферментный анализ АПФ.
2.6. Конъюгирование моноклональных антител 9В9 с аденовирусом.
2.6.1. Получение аденовируса.
2.6.2. Взаимодействие вирусных частиц, покрытых конъюгатом 9В9-анти-кноб-РаЬ с клетками.
2.6.3. Определение активности люциферазы.
2.6.3.1. Определение активности люциферазы в лизатах клеточных культур.
2.6.3.2.0пределение активности люциферазы в гомогенатах органов.
2.6.4. Определение (З-галактозидазной активности.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Модификация антител против АПФ для визуализации сосудов легких и направленного транспорта лекарств к легочному эндотелию.
3.1.1. Сравнение различных методов-мечения антител радиоизотопами для визуализации сосудов легких.
3.1.2. Биотинилирование моноклональных антител к АПФ.
3.1.2.1 Подбор условий биотинилирования.
3.1.2.2. Проверка иммунологических свойств биотинилированых моноклональных антител 9В9.
3.1.2.3 Проверка антигеневязывающей активности биотинилированых антител 9В in vitro.
3.1.2.4. Проверка антигеневязывающей активности биотинилированых антител 9В9 in vivo.
3.1.3 Получение биспецифических антител - коньюгатов моноклональных антител к АПФ с другими антителами.
3.1.3.1. Получение коньюгата 9В9 и антител, направленных против FLAG эпитопа аденовируса.
3.1.3.2. Получение бис-коньюгатов антител.
3.1.3.3 Получение коньюгата моноклональных антител к АПФ с Fab фрагментом антител против поверхностного knob-белка аденовируса.
3.2 Сравнение разных антител к эндотелиальным антигенам в качестве вектора для направленной доставки лекарств к эндотелию сосудов легких.
3.2.1. Распределение эндотелиальных антигенов в сосудистом русле крысы.
3.2.2 Распределение меченых антител в организме.
3.2.3 Накопление меченных антиэндотелиальных антител в перфузированных легких
3.3. Создание клеточной модели АПФ-зависимого направленного транспорта лекарств в сосуды легких.
3.4. АПФ-зависимый направленный транспорт генетического материала к легочному эндотелию.
3.4.1. Коньюгирование антител с олигонуклеотидами.
3.4.3. АПФ-зависимый транспорт генов с помощью аденовируса.