О пространственной структуре вируса гриппа: Исследование методом тритиевой планиграфии Федорова, Наталия Викторовна

Краткое описание

Федорова,НаталияВикторовна.Опространственнойструктуревирусагриппа:Исследованиеметодомтритиевойпланиграфии: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.06. - Москва, 1999. - 154 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 2
ОГЛАВЛЕНИЕ стр. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ Глава!. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЬВ 1. Современные представления о структурной организации вирионавирусагриппа. 1.1 Молекулярные компоненты вирионавирусагриппа1.2 Структурная организация вирионавирусагриппа. 2.СтруктураМ 1 белка. Его основные функциональные

стр. 2
их топологии. 3.4Тритиеваяпланиграфиябиологических макромолекулярных комплексов. 3.4.1Исследованиеструктурырибосом 3.4.2Исследованиеструктурыхромосом. 3.4.3 Топография доступной поверхности иструктуравирусатабачной мозаики 3.4.4 Топография доступной поверхностивирусаX картофеля. Модель

стр. 24
анализ и внутриклеточная локализация М1 белкавирусагриппа. Значимость М1 белка в формировании иммунитета квирусугриппане вполне ясна, хотя в клиническихисследованияхпосле инфицированиявирусомгриппаили вакцинациивирусомгриппанаходят значительные уровни антител к М1 белку. Вуйк с соавторами сообщили

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Федорова, Наталия Викторовна
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Современные представления о структурной 8 организации вириона вируса гриппа.
1.1 Молекулярные компоненты вириона вируса 8 гриппа
1.2 Структурная организация вириона вируса гриппа.
2. Структура М 1 белка. Его основные 14 функциональные и антигенные характеристики
2.1 Первичная структура белка.
2.2 РНП-М1 взаимодействия.
2.3 Взаимодействие М1 белка с мембраной.
2.4 Взаимодействие М1 белка с поверхностными 22 белками вируса гриппа.
2.5 Антигенный анализ и внутриклеточная 24 локализация М1 белка вируса гриппа.
2.6 Кристаллографический анализ структуры М1 28 белка.
3. Новые методы в изучении пространственной структуры мембранных белков.
3.1 Возможности современных РСА и ЯМР для 35 изучения структурной организации мембранных белков.
3.2 Сканирующая и криоэлектронная микроскопия.
3.3 Методы предсказания а-спиральных структур 40 мембранных белков и их топологии.
3.4 Тритиевая планиграфия биологических 48 макромолекулярных комплексов.
3.4.1 Исследование структуры рибосом
3.4.2 Исследование структуры хромосом.
3.4.3 Топография доступной поверхности и 54 структура вируса табачной мозаики
3.4.4 Топография доступной поверхности вируса X 60 картофеля. Модель пространственной укладки белка оболочки в вирусе.
3.4.5 Тритиевая планиграфия как 66 экспериментальный метод исследования поверхности целых клеток.
Глава II. Экспериментальная часть
1. Объекты исследования.
1.1 Получение препаратов вируса гриппа.
1.2 Выделение гемагглютинина с помощью 71 протеазы бромелаин.
1.3 Получение и очистка малых однослойных 71 везикул
1.4 Получение больших моноламеллярных 72 липосом с включенным нигерицином в липидной мембране.
1.5 Встраивание нигерицина в мембрану 73 больших моноламеллярных липосом.
1.6 Получение малых лецитиновых липосом.
1.7 Характеристика препаратов липосом.
2. Методы исследования.
2.1. Ультрацентрифугирование.
2.2. Электронномикроскопический анализ вируса.
2.3. Анализ размера вирусных частиц и 75 липосом с помощью метода динамического светорассеяния.
2.4 Электрофорез в полиакриламидном геле с 76 ДСН.
2.5 Методы электроэлюции из ПААГ.
2.6 Высокоэффективная жидкостная 78 хромотография в обращенной фазе.
2.7 Ферментативный гидролиз М1 белка.
2.8 Кислотный гидролиз.
2.9 Аминокислотный анализ
2.10 Аминокислотный сиквенс пептидов.
2.11 Электрофорез в полиакриламидном геле с 81 ДСН.
2.12 Определение гемагглютинирующей (ГАЕ), 81 гемолизирующей (ГЛ) активности и инфекционности в препаратах вируса гриппа.
3. Методы выделения матриксного М1 белка.
3.1 Метод кислотной солюбилизации.
3.2 Метод хлороформ-метанольной экстракции.
4. Введение тритиевой метки в исследуемые 84 объекты.
5. Контроль за сохранением нативности меченых 86 препаратов вируса.
5.1 Анализ меченных тритием вирусных белков.
Глава
Анализ включения метки в структурные 88 компоненты липосом.
Ковалентное связывание М1 белка с тиопропилсефарозой - 6В.
Расщепление иммобилизованного М1 белка и 89 разделение пептидов.
Определение удельного мечения пептидов.
Результаты и обсуждение.
Оптимизация методов выделения основных структурных белков вируса гриппа. Модель для изучения молекулярных механизмов мембран-белковых взаимодействий.
Получение меченных тритием вирионов вируса гриппа и анализ включения метки в основные структурные белки. О локализации М1 белка в вирионе вируса гриппа.
Определение внутримолекулярного распределения метки в М1 белке. Моделирование укладки М1 белка в вирусе гриппа