Получение мономерной формы флуоресцентного белка SAASoti и применение его в методах субдифракционной и флуоресцентной корреляционной микроскопии Соловьев Илья Дмитриевич

Краткое описание

Соловьев,ИльяДмитриевич.ПолучениемономернойформыфлуоресцентногобелкаSAASotiиприменениееговметодахсубдифракционнойифлуоресцентнойкорреляционноймикроскопии: диссертация ... кандидата химических наук : 03.01.04 /СоловьевИльяДмитриевич; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 106 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
БИОТЕХНОЛОГИИ» ИНСТИТУТ БИОХИМИИ имени А.Н. БАХА РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК на правах рукописиСоловьевИльяДмитриевичПолучениемономернойформыфлуоресцентногобелкаSAASoti иприменениееговметодахсубдифракционнойифлуоресцентнойкорреляционноймикроскопии03.01.04 Биохимия диссертация на соискание ученой

стр. 2
.....................................................................................................10 1.1. Общая характеристикафлуоресцентныхбелков.................................................10 1.2. Олигомерное состоянияфлуоресцентныхбелков................................................11 1.3.Получениемономерныхфотоконвертируемыхфлуоресцентныхбелков.......12 1.4.Методыопределения олигомерного состояния...

стр. 13
в более длинноволновую область. Первым обнаруженным фотоконвертируемымбелкомбыл Kaede [23].ФлуоресцентныйбелокKaede существует в виде тетрамера, однако работ пополучениюмономернойформыданногобелкане проводилось. Следующим был обнаружен тетрамерныйбелокEosFP и полученаегомономернаяформаmEosFP [24]. Дляполучениямономернойформыбыл учтен успешный опыт работы сбелкомDsRed,...

Оглавление диссертациикандидат наук Соловьев Илья Дмитриевич
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика флуоресцентных белков
1.2. Олигомерное состояния флуоресцентных белков
1.3. Получение мономерных фотоконвертируемых флуоресцентных белков
1.4. Методы определения олигомерного состояния флуоресцентных белков и их особенности
1.5. Методы супер-разрешающей микроскопии
1.5.1. Методы микроскопии, основанные на изменении формы функции распределения точечного источника света
1.5.2. Методы локализационной микроскопии
1.5.3. Методы флуктуационной микроскопии
1.6. Особенности фотопревращений флуоресцентных белков, используемых в методах субдифракционной микроскопии
1.6.1. Необратимая фотоконверсия (зелёный^-красный)
1.6.2. Праймированная фотоконверсия
1.6.3. Обратимое фотопереключение (флуоресцентное^-тёмное состояние)
1.6.4. Триплетные состояния флуоресцентных белков
1.6.5. Другие виды превращений фототрансформируюемых флуоресцентных белков
1.6.6. Бифотохромные белки
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1. Реактивы и материалы
2.2. Приборы
2.3. Общие методики
2.3.1. Получение генетических конструкций и трансформация клеток E. coli
2.3.2. Выделение и очистка различных мутантных форм флуоресцентного белка SAASoti
2.3.3. Гель-фильтрация (анализ олигомерного состояния)
2.3.4. Химическая модификация янтарным ангидридом
2.3.5. Спектральные и флуоресцентные методы
2.3.6. Масс-спектрометрический анализ
2.3.7. Ведение культуры клеток млекопитающих
2.3.8. Получение субдифракционных изображений методом PALM
2.3.9. Флуоресцентная корреляционная спектроскопия (FCS) и флуоресцентная микроскопия с временным разрешением (FLIM)
Глава 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Анализ олигомерного состояния и поверхностных аминокислотных остатков
3.2. Сайт-направленный мутагенез для получения мономерной формы флуоресцентного белка SAASoti
3.3. Определение олигомерного состояния вариантов SAASoti методом 2fFCS
3.4. Физико-химические свойства различных вариантов SAASoti
3.6. Необратимая фотоконверсия (зеленый^красный) в живых клетках
3.7. Обратимое фотопереключение зеленой формы
3.8. Фотопереключение красной формы V127T SAASoti
3.9. Масс-спектрометрический анализ образцов V127T SAASoti после фотопереключения зеленой формы
3.9. Экспрессия в клетках млекопитающих и субдифракционная микроскопия
3.10. FRET-сенсор на основе флуоресцентного белка SAASoti для изучения активности каспазы-3 после индукции апоптоза в живых клетках
3.11. Обсуждение результатов
Выводы