Поверхностные белки кератиноцитов, участвующие в транспорте нуклеиновых кислот Челобанов, Борис Павлович

Краткое описание

Челобанов,БорисПавлович.Поверхностныебелкикератиноцитов,участвующиевтранспортенуклеиновыхкислот: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Новосибирск, 2005. - 136 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
(оЛ' 0 5 - Ь 3 ^ ^ РОССИЙСКАЯ А К ^ Е М И Я НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ БИОЛОГИИ И ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ На правах рукописиЧЕЛОБАНОВБОРИСПАВЛОВИЧПОВЕРХНОСТНЫЕБЕЛКИКЕРАТИНОЦИТОВ,УЧАСТВУЮЩИЕВТРАНСПОРТЕНУКЛЕИНОВЫХКИСЛОТ03.00.04-биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени

стр. 2
Участиебелковвтранспортенуклеиновыхкислотв клетки 1.2.1. Выявлениебелков,участвующихвтранспортенуклеиновыхкислот1.2.2. Идентификациябелков,участвующихвтранспортенуклеиновыхкислот1.2.2.2. Связываниенуклеиновыхкислотс альбумином 1.2.2.3.Белки, ответственные затранспортнуклеиновыхкислотв сперматозоиды 1.2.2.4. Связывание G-богатых...

стр. 28
влиять на распределение олигонуклеотидов в клетке [110]. #) 1.2. Участиебелковвтранспортенуклеиновыхкислотв клетки 1.2.1. Выявлениебелков,участвующихвтранспортенуклеиновыхкислотДля выявленияповерхностныхклеточныхбелков, связывающихнуклеиновыекислоты, бьшо использовано несколько подходов:

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Челобанов, Борис Павлович
ВВЕДЕНИЕ.
1. Литературный обзор.
1.1. Транспорт нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих. ф 1.1.1. Механизмы транспорта нуклеиновых кислот в клетки.
1.1.2. Методы изучения транспорта нуклеиновых кислот в клетки.
1.1.3. Проблемы, связанные с использованием флуоресценции для изучения транспорта нуклеиновых кислот в клетки.
1.1.3.1. Тушение флуоресценции.
1.1.3.2. Использование реагентов, предотвращающих выгорание флуорохрома.
1.1.3.3. Флуоресценция флуорохрома в составе нуклеиновых кислот.
1.1.4. Транспорт флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов в клетки.
1.2. Участие белков в транспорте нуклеиновых кислот в клетки.
1.2.1. Выявление белков, участвующих в транспорте нуклеиновых кислот.
1.2.2. Идентификация белков, участвующих в транспорте нуклеиновых кислот.
1.2.2.1. Связывание нуклеиновых кислот с глицеральдегид-З'-фосфатдегидрогеназой
1.2.2.2. Связывание нуклеиновых кислот с альбумином.
1.2.2.3. Белки, ответственные за транспорт нуклеиновых кислот в сперматозоиды.
1.2.2.4. Связывание й-богатых олигонуклеотидов с нуклеолином.
1.2.2.5. Эзрин и моезин - компоненты транспортной системы.
1.2.2.6. ЫАСЬ - мембранный канал, транспортирующий короткие одноцепочечные нуклеиновые кислоты.
1.2.2.7. Каналы для транспорта нуклеиновых кислот могут формироваться из факторов транскрипции.
1.2.3.8. МЫАВ - мембранный белок, связывающий нуклеиновые кислоты.
1.2.2.9. Гепарин-связывающий интегрин Мас-1.
1.2.2.10. Белки, участвующие в реализации иммуностимулирующего действия Срй ДНК.
1.2.2.11. Участие скавенджер-рецептора в связывании и транспорте нуклеиновых кислот.
1.2.2.12. Заключение.
2. Материалы и методы.
2.1. Материалы.
2.2. Получение и очистка 32Р — меченых олигонуклеотидов.
2.3. Синтез модифицированных олигонуклеотидов.
2.4. Клетки и условия их культивирования.
2.5. Приготовление слайдов и микроскопия.
2.6. Аффинная модификация белков, связывающих нуклеиновые кислоты.
2.7. Исследование специфичности аффинной модификации белков.
2.8. Исследование локализации белков, связывающих нуклеиновые кислоты.
2.9. Влияние целостности клеточной мембраны на модификацию белков, связывающих нуклеиновые кислоты, и внутриклеточный транспорт олигонуклеотидов.
2.10. Определение констант диссоциации комплексов олигонуклеотид-белок и определение количества олигонуклеотид-связывающих белков на клетках.
2.11. Получение и характеризация антител против флуоресцеина.
2.12. Иммуноферментное окрашивание.
2.13. Аффинная хроматография олигонуклеотид-связывающих белков, модифицированных Р1и-1уз-р(М)1б-с^-ио на ультрагеле А2 с иммобилизованными антителами против флуоресцеина.
2.14. Синтез пептидов и изготовление конъюгатов этих пептидов с бычьим сывороточным альбумином.
2.15. Приготовление человеческого сывороточного альбумина для иммунизации кроликов.
2.16. Синтез сорбентов для выделения специфических антител против пептидов и человеческого сывороточного альбумина.
2.17. Получение и характеризация антител против К1, К2е и альбумина.
3. Результаты и обсуждение.
3.1. Аффинная модификация реакционноспособными производными олигонуклеотидов поверхностных белков клеток различного тканевого происхождения.
3.2. Влияние условий инкубации аффинных реагентов с клетками на аффинную модификацию олигонуклеотид-связывающих белков.
3.3. Влияние ингибиторов активного транспорта на модификацию белков.
3.4. Исследование локализации модифицированных белков.
3.5. Влияние состояния клеточной мембраны на аффинную модификацию олигонуклеотид-связывающих белков и транспорт олигонуклеотидов в клетки.
3.6. Оценка количества олигонуклеотид-связывающих белков на поверхности клетки.
3.7. Реакционноспособные олигонуклеотидные реагенты.
3.8. Исследование транспорта флуоресцентно-меченых производных олигонуклеотидов в клетки различных линий.
3.9. Исследование эффективности модификации поверхностных белков клеток линии А431 различными производными олигонуклеотидов.
3.10. Исследование модификации клеток линии А431 реакционноспособными производными флуоресцентно-меченого олигонуклеотида.
3.11. Получение антител против флуоресцеина и их взаимодействие с флуоресцеин-содержащими олигонуклеотидами.
3.12. Оптимизация условий выделения модифицированных белков, связывающих нуклеиновые кислоты, на сорбенте с антителами против флуоресцеина.
3.13. Выделение белков, связывающих нуклеиновые кислоты.
3.14. Идентификация олигонуклеотид-связывающих белков.
3.15. Изготовление конъюгатов и сорбентов на основе пептидов.
3.16. Получение и тестирование антител против альбумина и пептидов р19ир13.
3.17. Исследование клеточной локализации выделенных белков.
3.18. Компьютерный анализ структуры альбумина.
ВЫВОДЫ.