Регуляция экзоцитоза в нейтрофилах человека Набокина, Светлана Михайловна

Краткое описание

Набокина,СветланаМихайловна.Регуляцияэкзоцитозавнейтрофилахчеловека: диссертация ... доктора биологических наук : 03.00.25. - Москва, 1999. - 223 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
На правах рукописи УДК 576.382:612.112.91НАБОКИНАСветланаМихайловнаРЕГУЛЯЦИЯЭКЗОЦИТОЗАВНЕЙТРОФИЛАХЧЕЛОВЕКАСпециальность: 03.0025 - клеточная биология

стр. 3
экзоцитоза. Воз можная роль аннексинов П. Материалы и методы исследований. 1. Объекты исследования 2. Материальт 3. Методы 3.1 Выделениенейтрофиловчеловека3.2 Субклеточное фракционированиенейтрофиловчеловека3.3 Культура клеток 3.4 Электрофорез белков 3.5 Иммуноблоттинг (Вестерн-блот анализ) 3.5.1

стр. 4
антисыворотки 54 55 55 56 56 57 58 59 64 65 65 66 67 67 68 68 70 70 71 73 74 3.18 Изз^ение взаимодействия аннексина I с желатиназными грануламиней­ трофиловчеловекаIII. Полученные результаты и их обсуждение 1. Белки семейства синтаксинов внейтрофилахчеловека, 1.1. Экспрессия синтаксинов внейтрофилахчеловека.

Оглавление диссертациидоктор биологических наук Набокина, Светлана Михайловна
Введение
I. Обзор литературы.
1. Внутриклеточные гранулы нейтрофилов человека
1.1. Классификация и общая характеристика гранул
1.2. Мобилизация гранул.
2. Модель слипания/слияния мембран (SNARE гипотеза),
2.1. Характеристика основных белковых компонентов модели,
2.1.1. VAMP/синаптобревин
2.1.2. Синтаксин
2.1.3. SNAP
2.1.4. Синаптотагмин
2.1.5. NSF.
2.1.6. SNAP
2.2. Механизм слипания/слияния мембран
3. Особенности Са2+-триггерной стадии экзоцитоза. Воз можная роль аннексинов
II. Материалы и методы исследований.
1. Объекты исследования
2. Материалы,
3. Методы
3.1 Выделение нейтрофилов человека
3.2 Субклеточное фракционирование нейтрофилов человека
3.3 Культура клеток
3.4 Электрофорез белков
3.5 Иммуноблоттинг (Вестерн-блот анализ) 53 3.5.1 Перенос фракций из геля на фильтр
3.5.2 Иммунное выявление антигенов на фильтре
3.6 Протеолиз SNAP-25 ботулиническим токсином BoNT/A
3.7 Активация нейтрофилов
3.8 Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия
3.9 Иммуноэлектронная микроскопия
3.10 Экстракция РНК
3.11 Синтез к ДНК
3.12 Полимеразная цепная реакция
3.13 Гель-электрофорез ДНК
3.14 Клонирование ДНК
3.14.1 Лигирование
3.14.2 Трансформация бактерий
3.14.3 Анализ рекомбинантных клонов ДНК
3.14.3.1 Выделение плазмидной ДНК
3.14.3.2 Расщепление ДНК рестриктазами (рестрикция)
3.14.3.3 Определение нуклеотидной последовательности ДНК
3.15 Получение гибридных белков GST-SNAP-23А и GST-SNAP-23B
3.15.1 Конструирование вектора для экспрессии GST-SNAP-23А/В
3.15.2 Экспрессия и очистка GST-SNAP-23 А/В
3.16 Связывание белков in vitro
3.17 Получение антисыворотки
3.18 Изучение взаимодействия аннексина I с желатиназными гранулами нейтрофилов человека
III. Полученные результаты и их обсуждение
1. Белки семейства синтаксинов в нейтрофилах человека,
1.1. Экспрессия синтаксинов в нейтрофилах человека.
1.2. Определение первичной структуры синтаксинов 3, 4 и 6 из нейтрофилов человека.
1.3. Экспрессия синтаксинов в клетках линии HL-60, дифференцированных в нейтрофилы
1.4. Внутриклеточная локализация синтаксина 6 в нейтрофилах человека 108 2. Белки семейства VAMP/синаптобревинов в нейтрофилах человека
2.1. УАМР-1 нейтрофилов человека: идентификация, первичная структура и внутриклеточная локализация
2.2. VAMP-2 нейтрофилов человека: идентификация и первичная структура 130 3. Белки семейства SNAP-25 в нейтрофилах человека
3.1. SNAP-25: идентификация и внутриклеточная локализация
3.2. Внутриклеточная локализация SNAP-23 в нейтрофилах человека
4. Взаимодействие синтаксина 6 и SNAP
5. Схема регуляции экзоцитоза с участием SNARE
6. Взаимодействие аннексина I с желатиназными гранулами нейтрофилов человека
Выводы