РНК-полимераза бактерий: иммунология и молекулярная генетика Никифоров, Вадим Георгиевич

Краткое описание

Никифоров,ВадимГеоргиевич.РНК-полимеразабактерий:иммунологияимолекулярнаягенетика: диссертация ... доктора биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1983. - 291 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
^i:<S5'S/&^'3 АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТМОЛЕКУЛЯРНОЙГЕНЕТИКИНа правах рукописи УДК 577.214.32НИКИФОРОВВАДИМГЕОРГИЕВИЧРНК-ПОЛИМЕРАЗАБАКТЕРИЙ:ИММУНОЛОГИЯИМОЛЕКУЛЯРНАЯГЕНЕТИКА03.00.03 -Молекулярнаябиология Д и с с е р т а ц и я на соискание ученой степени доктора биологических наук # — Москва

стр. 7
программы изложены в тексте. - 8 Научная новизна и практическая ценность. сравнительный подход к изучениюРНК-полимеразы. Впервые применен функциональной роли субъединиц Продемонстрирована структурная и функциональная филогенетически далеких видовбактерий. промоторовРНК-полимеразагомологияРНК-полимеразПоказано, что в процессе открывания играет активную роль. Впервые показано, что процесс открывания так и от минимального промоторов зависит как...

стр. 10
атома цинка, необходимые для каталитической функции /18,19/. Известны, две ферменуативно активные формыРНК-полимеразы: полнаяРНК-по- - II лимераза (холофермент) и минимальнаяРНК-полимераза("кор"-фермент). МинимальнаяРНК-полимеразаотличается от полной отсутст­ вием одной из субъединиц, называемой <f

Оглавление диссертациидоктор биологических наук Никифоров, Вадим Георгиевич
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. РНК-ПОЛИМЕРАЗА £. cod : СТРУКТУРА И НАЧАЛЬНЫЕ
СТАДИИ ЦИКЛА ТРАНСКРИПЦИИ.
1.1.Структура РНК-полимеразы
1.1.1. Очистка.
1.1.2. Субъединичный состав.
1.1.3. Самосборка. . .13"
1.1.4. Четвертичная структура.
1.1.4.1. Ограниченный протеолиз.
1.1.4.2. Сшивки бифункциональными реагентами
1.1.4.3. Электронная микроскопия
1.1.4.4. Малоугловое нейтронное и рентгеновское рассеяние в растворе.
1.2. Начальные стадии цикла транскрипции
1.2.1. Общая характеристика. реакций, катализируемых РНК-полимеразой
1.2.2. Цикл транскрипции
1.2.3. Связывание с ДНК.
1.2.3.1. Свойства комплексов РНК-полимеразы с ДНК.
1.2.3.2. Поиск промотора
- 1.2.3.3. Нуклеотидная последовательность промоторов.
1.2.3.4. Контакты .РНК-полимеразы с промоторами
1.2.4. Инициация
1.2.4.1. Выбор стартовой точки
1.2.4.2. Изменение свойств комплекса РНК-полимеразы с ДНК после начала синтеза РНК.
1.2.4.3. Абортивная инициация.
1.2.4.4-. Рифампицин - ингибитор продуктивной инициации.
ГЛАВА 2. СТРУКТУРНАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ГОМОЛОГИЯ
РНК-ПОЛИМЕРАЗ РАЗНЫХ БАКТЕРИЙ.
2.1. Сравнение РНК-полимераз мезофильной B.c&fc
И термофильной
2.2. Сравнение структурно-функциональных свойств бактериальных РНК-полимераз (литературные данные)
2.2.1. Субъединичный состав.
2.2.2. Гомология субъединиц.
2.2.3. Узнавание промоторов в чужеродной ДНК
ГЛАВА 3. ЭВОЛЮЦИОННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ СТРУКТУРЫ БАКТЕРИАЛЬНЫХ
РНК-ПОЛИМЕРАЗ.
3.1. Пептидные карты о(.-субъединицы.
3.2. Участки субъединиц, выступающие на поверхность минимальной РНК-полимеразы.
3.3. Участки субъединиц, скрытые внутри молекулы РНК-полимеразы.
3.4. Консервативность структуры центра связывания ДНК.
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ РОЛИ СУБЬЕДИНИЦ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ
С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ РОЛИ СУБЬЕДИНИЦ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ С ПОМОЩЬЮ ХОЛОДОЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ МУТАЦИЙ
5.1. Получение холодочувствительных мутантов
5.2. Идентификация субъединиц, затронутых мутациями.
5.3. Влияние холодочувствительных мутаций на функциональные свойства РНК-полимеразы.
5.3.1. Элонгация.
5.3.2. Открывание промоторов на ДНК фага Т2.
5.3.3. Стабильность закрытых комплексов РНК-полимеразы с ДНК фага Т2.
5.3.4. Влияние сверхспирализации.
5.3.5. Связывание с разными ДНК.
5.4. Итоги изучения холодочувствительных мутантных РНК-полимераз
5.5. Термочувствительные мутации в генах РНК-полимеразы.
5.6. Амбер-мутации в генах РНК-полимеразы.
ГЛАВА 6. ИДЕНТИФИКАЦИЯ АМИНОКИСЛОТНЫХ ЗАМЕН ПРИ МУТАЦИЯХ
УСТОЙЧИВОСТИ К РИФАМПИЦИНУ
ГЛАВА 7. МЕТОДИКИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ
7.1. РНК-полимераза.
7.1.1. Получение экстрактов для определения активности РНК-полимеразы
7.1.2. Получение экстрактов для иммунологического сравнения РНК-полимераз
7.1.3. Определение концентрации белка.
7.1.4. Очистка РНК-полимераз.
7.1.5. Разделение субъединиц и реконструкция.
7.1.6. Иодирование.
7.1.7. Пептидные карты.
7.1.8. Определение активности РНК-полимеразы.
7.1.9. Определение связывания РНК-полимеразы с ДНК
7.2. ДНК.
7.2.1. Получение фаговых ДНК.•.
7.2.2. Получение плазмидных ДНК.
7.2.3. Определение' контактов с РНК-полимеразой
7.2.4. Определение нуклеотидной последовательности
7.3. Иммунология.
7.3.1. Иммунизация кроликов.
7.3.2. Получение моновалентных антител.
7.3.3. Приготовление иммуносорбентов.
7.3.4. Связывание меченых препаратов РНК-полимеразы с иммуносорбентами.
7.3.5. Получение гибридом.
7.3.6. Радиоиммунологический анализ.
7.3.7. Реакция с антигенами, иммобилизованными на нитроцеллюлозе.
7.4. Мутагенные обработки.