Структура и свойства малого белка теплового шока Hsp22 и его точечного мутанта, экспрессируемого при дистальной моторной нейропатии II типа Ким, Мария Вячеславовна

Краткое описание

Ким,МарияВячеславовна.СтруктураисвойствамалогобелкатепловогошокаHsp22иеготочечногомутанта,экспрессируемогопридистальноймоторнойнейропатииIIтипа: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 2005. - 134 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
//•• ^^- 3Ms^московский ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА На правах рукописи •> ч IКимМарияВячеславовнаСТРУКТУРАИСВОЙСТВАМАЛОГОБЕЛКАТЕПЛОВОГОШОКАHSP22НЕГОТОЧЕЧНОГОМУТАНТА,ЭКСПРЕССИРУЕМОГОПРИДИСТАЛЬНОИМОТОРНОЙНЕЙРОПАТИИИТИПА03.00.04 - биологическая химия Диссертация

стр. 39
следующие задачи: 1. Разработать метод выделения рекомбинантногоHsp22дикоготипаиеготочечногоMyrairra К14IE, 2. Проанализировать тканевое распределение I Isp22, 3. Исследоватьструктуруи олигомерное состояние рекомбинантногоHsp22дикоготипаиеготочечногоК14 IE-мутанта, 4. Проанализировать возможность образования гетероолигомермых комплексов междуHsp22и другимималымибелкамитеплового...

стр. 65
1 4 7 7 6 3 1 1 6 8 9 8 1 7 9 166-IEAPQVPPYSTFGESSFNNELPQDSQEVTCT РРР 9715789999999941102677568762047 рр 196Hsp22wt К141Е-мутантструктураточность предсказанияструктураточность предсказания Аминокислотная последовательностьHsp22wt К141Е-мутантструктураточность предсказанияструктураточность предсказания Аминокислотная последовательностьHsp22wt К141Е-мутантструктураточность предсказанияструктура...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Ким, Мария Вячеславовна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика семейства малых белков теплового шока
1.2. Строение малых белков теплового шока
1.3. Функции малых белков теплового шока
1.3.1. Шаперонная активность sHsp
1.3.2. Влияние sHsp на полимеризацию актина и регуляция динамики цитоскелета
1.3.3. Участие si Isp в регуляции апоптоза
1.3.4. Роль si Isp в развитии нейродегенеративных заболеваний и катаракты
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Препаративные методы
2.1.1. Экспрессия и выделение Hsp22 дикого типа и его К141Е-мутанта
2.1.2. Выделение актина
2.2. Определение тканевого распределения Hsp
2.3. Методы, использованные для исследования структуры Hsp
2.3.1. Измерение кругового дихроизма
2.3.2. Гель-фильтрация
2.3.3. Нативный электрофорез
2.3.4. Использование методов химической модификации для изучения четвертичной структуры
2.3.4.1 Модификация диметилсуберимидатом (ДМС)
2.3.4.2. Образование дисульфидных связей
2.3.5.11еравновеспое аналитическое ультрацентрифугирование
2.4. Определение протеинкиназной активности
2.5. Методы, использованные при изучении взаимодействия Hsp22 с нативным актином
2.5.1. Метод флуоресцентной спектроскопии
2.5.2 Метод ультрацентрифугирования
2.6. Методы, использованные при изучении взаимодействия Hsp22 с Hsp27 и Hsp
2.6.1. Гель-фильтрация
2.6.2. Светорассеяние
2.7. Определение шаперонной активности
2.7.1. Определение шаперонной активности с инсулином
2.7.2. Определение шаперонной активности с алкогольдегидрогеназой
2.7.3. Определение шаперонной активности с роданазой
2.7.4. Влияние Hsp22 на агрегацию денатурированного актина 52 2.8.11екоторые аналитические методы
2.8.1. Определение концентрации белка
2.8.1.1. Спектрофотометрический метод
2.8.1.2. Метод Брэдфорд
2.8.2. SDS-Электрофорез в ПААГ
2.8.3. Иммуноблотгинг
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Разработка метода выделения рекомбинантного Hsp человека из E.Coli
3.2. Тканевое распределение Hsp
3.3. Структура и некоторые физико-химические свойства Hsp
3.3.1 &мричная и третичная структура
3.3.2 Четвертичная структура
3.3.3 Влияние рН на стабильность и структуру Hsp22 и его К141Е-мутанта
3.4. Определение протеинкиназной активности Hsp
3.5. Hsp22 не ингибирует полимеризацию актина
3.6. Взаимодействие Hsp22 с другими малыми белками теплового шока
3.7. Сравнение шаперонной активности I Isp22 дикого типа и его К141 Е-мутанта
IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Выделение и характеристика некоторых физико-химических свойств I Isp
4.2. Протеинкиназная активность I Isp
4.3. Взаимодействие Hsp22 с другими малыми белками теплового шока и возможное участие Hsp22 в регуляции полимеризации актина
4.4. Шаперонная активность Hsp22 111 V. ВЫВОДЫ 114 СПИСОК J1ИТЕРАТУ РЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АДГ алкогольдегидрогеназа
АТФ аденозинтрифосфат бис-трис бис(2-гидроксиэтил)-амино-трис-(гидроксиметил)метан
ДМС диметилсуберимидат
К141 Е-мутант Hsp22 точечный мутант Hsp22 с заменой Lys 141 на Glu кд круговой дихроизм
МАРКАР-киназа протеинкиназа, активируемая митоген-активируемой протеинкиназой (mitogen-activated protein kinase activated protein kinase) мРНК матричная PI IK
МЭ меркаптоэтанол
ИАДФИ никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный
ПААГ полиакриламидный гель
Г1СА персульфат аммония
РНК рибонуклеиновая кислота
ТЕМЕД М,1М,>Г,>Г-тетраметилэтилендиамин трис Трис-гидроксиметил амино метан
ФМСФ фенилметилсульфонилфторид цАМФ циклический аденозинмонофсфат
ЭДТА этилендиаминтетраацетат bis-ANS 4,4'-дианилин-1,Г-динафталин-5,5'-дисульфоновая кислота
СМГ2 амиотрофия Шарко-Мари-Туга второго типа (Charcot-Marie-Thooth desease type И) cvllsp сердечно-сосудистый белок теплового шока (cardiovascular heat shock protein) dllMN наследственная дистальная моторная нейропатия второго типа (distal hereditary motor neuropathy type II)
DRM миопатия, связанная с десмином (desmin-related myopathy)
ECL метод усиленной хемилюминесценции (enchanced chemiluminiscence)
FRET флуоресцентный резонансный перенос энергии (fluorescence resonance energy transfer)
F-актин фибриллярный актин
GST глутатион-5-трансфераза (glutathione-S-transferase)
G-актин глобулярный актин
HI£PI£S Ы-[2-гидроксиэтил]пиперазин-ЬГ-[2-этансульфоновая кислота] lisp белок теплового шока (heat shock protein)
LB среда Луриа-Бертани
MKBP белки-активаторы протеинкиназы, характерной для скелетных мышц с миотонической дистрофией (myosin-kinase binding protein)
ODFP Белок-1 наружных плотных фибрилл сперматозоидов (outer dense fiber protein-1)
SDS додецилсульфат натрия si Isp малый белок теплового шока (small heat shock protein)
TBST трис-солевой буфер (tris-buffer saline) wt белок дикого типа (wild type)