Влияние точечных мутаций и некоторых посттрансляционных модификаций на структуру и свойства малых белков теплового шока человека Муранова Лидия Константиновна

Краткое описание

Муранова,ЛидияКонстантиновна.Влияниеточечныхмутацийинекоторыхпосттрансляционныхмодификацийнаструктуруисвойствамалыхбелковтепловогошокачеловека: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.04 /МурановаЛидияКонстантиновна; [Место защиты: Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 123 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М. В. ЛОМОНОСОВА БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ На правах рукописиМурановаЛидияКонстантиновнаВЛИЯНИЕТОЧЕЧНЫХМУТАЦИЙИНЕКОТОРЫХПОСТТРАНСЛЯЦИОННЫХМОДИФИКАЦИЙНАСТРУКТУРУИСВОЙСТВАМАЛЫХБЕЛКОВТЕПЛОВОГОШОКАЧЕЛОВЕКА03.01.04 биохимия Диссертация на соискание

стр. 10
последовательность, соответствующая β6 складкемалыхбелковтепловогошокабактерий и растений исчезла в ходе эволюции и отсутствует вструктуремалыхбелковтепловогошокачеловека. Полученные впоследствииструктурымалыхбелковтепловогошокачеловекаподтвердили β-складчатуюструктуруα-кристаллинового домена sHSPs.

стр. 36
вызывает исследованиеструктурыи физико-химическихсвойствмутантных форм sHSPs, а такжемалыхбелковтепловогошока, подвергшихсяпосттрансляционными химическиммодификациям. - 37 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Получение препаратовмалыхбелковтепловогошокачеловекаПолучение кодирующих конструкций sHSPs Препараты рекомбинантныхмалыхбелковтепловогошокачеловекаи исследуемых.

Оглавление диссертациикандидат наук Муранова Лидия Константиновна
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Структура и некоторые свойства аВ-кристаллина (HspB5)
Структура аВ-кристаллина (HspB5)
Функции аВ-кристаллина
Заболевания человека и HspB5
Некоторые свойства и функции HspB1
Структура HspBl
Функции HspBl
Заболевания, коррелирующие с мутациями HspBl
Структура и свойства HspB6
Структура HspB6
Функции HspB6
Посттрансляционные модификации sHSPs
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Получение препаратов малых белков теплового шока человека
Получение кодирующих конструкций sHSPs
Трансформация плазмид в штаммы E.coli методом теплового шока
Тестовая экспрессия мутантных белков
Препаративная экспрессия малых белков теплового шока
Выделение малых белков теплового шока
Хроматографические методы очистки sHSPs
Очистка мутантных форм sHSPs и белков дикого типа методом ионообменной хроматографии
Очистка мутантных форм sHSPs и белков дикого типа методом гель-хроматографии
Очистка мутантной формы HspB1 R127W методом гидрофобной хроматографии
Получение препаратов протеинкиназ
Коэкспрессия HspB5 и соответствующих протеинкиназ в клетках E. coli
Выделение и очистка в,_-кристаллина из хрусталика глаза быка
Модификация HspB6 метилглиоксалем
Ограниченный протеолиз sHSPs
Фосфорилирование малых белков теплового шока in vitro
Фосфорилирование sHSPs MAPKAP киназой
Фосфорилирование sHSPs cAMP-зависимой протеинкиназой А
Олигомерная структура малых белков теплового шока
Определение олигомерного структуры методом гель-фильтрации
Определение олигомерного структуры методом динамического лазерного светорассеяния
Метод аналитического ультрацентрифугирования и определение олигомерного состояния sHSPs
Анализ гетероолигомерных комплексов, образуемых различными малыми белками теплового шока
Использование метода гель-фильтрации для анализа гетероолигомерных комплексов малых белков теплового шока
Использование метода ионообменной хроматографии для анализа образование гетероолигомеров между HspB4 и HspB5
Идентификация гетероолигомерных комплексов HspB1-HspB6 путем химического «сшивания»
сульфгидрильных групп
Анализ гетероолигомеризации HspB5 и HspB4 методом нативного фореза по Девису
Определения шапероноподобной активности малых белков теплового шока
Аналитические методы исследования
Спектральные методы исследования
Метод собственной триптофановой флуоресценции
Спектральные методы анализа термостабильности малых белков теплового шока
Использование гидрофобного зонда bis-ANS для анализа гидрофобных свойств HspB1 и его точечных мутантных форм

Электрофоретические методы исследования
Метод электрофореза нуклеиновых кислот в агарозе
Метод SDS-электрофореза в полиакриламидном геле по Леммли
Метод электрофореза в мочевине по Перье-Перри
Метод нативного электрофореза по Девису
Спектрофотометрическое определение концентрации белка
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние мутаций, локализованных в а-кристаллиновом домене и коррелирующих с наследственной нейропатией Шарко-Мари-Тутса II типа, на структуру и физико-химические свойства HspBI
Спектральные свойства и термическая стабильность олигомеров исследуемых мутантных форм HspBI с
заменами в ACD
Влияние мутаций, локализованных в а-кристаллинового домене, на олигомерное состояние HspBI
Эффект аминокислотных замен в пределах а-кристаллинового домена на процессы
гетероолигомеризации HspBI
Влияние мутаций в а-кристаллиновом домене на шапероноподобную активность HspBI
Влияние мутаций, локализованных в N-концевом домене и коррелирующих с наследственной нейропатией Шарко-
Мари-Тутса II типа, на структуру и физико-химические свойства HspBI
Спектральные свойства и термическая стабильность олигомеров мутантных форм HspBI с заменами в
NTD, коррелирующими с нейропатией Шарко-Мари-Тутса II типа
Влияние точечных замен в N-концевом домене на олигомерное состояние HspBI
Влияние точечных мутаций в N-концевом домене на гетероолигомеризацию HspBI
Влияние мутаций в N-концевом домене на шапероноподобную активность HspBI
Влияние мутаций, локализованных в N-концевом домене и коррелирующих с наследственной катарактой, на
структуру и физико-химические свойства HspB5
Термическая стабильность олигомеров мутантных форм HspB5 с заменами в NTD, коррелирующими с наследственной катарактой
Влияние точечных замен в N-концевом домене на олигомерную структуру HspB5
Эффект точечных мутаций в N-концевом домене, коррелирующих с наследственной катарактой, на гетероолигомеризацию HspB5
Шапероноподобная активность HspB5, содержащего в N-концевом домене точечные замены, коррелирующие с наследственной катарактой
Влияние модификации метилглиоксалем (МГО) на структуру и физико-химические свойства малого белка теплового
шока HspB6
Спектральные свойства и термическая стабильность HspB6, модифицированного МГО
Влияние модификации МГО на олигомеризацию и гетероолигомеризацию HspB6
Влияние модификации метилглиоксалем на фосфорилирование HspB6 cAMP-зависимой протеинкиназой
Влияние модификации метилглиоксалем на шапероноподобную активность HspB6
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ