Воздействие на воспалительный статус адипоцитов как подход к регуляции их чувствительности к инсулину Стафеев Юрий Сергеевич

Краткое описание

Стафеев,ЮрийСергеевич.Воздействиенавоспалительныйстатусадипоцитовкакподходкрегуляцииихчувствительностикинсулину: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.04 /СтафеевЮрийСергеевич; [Место защиты: Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича]. - Москва, 2019. - 155 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
КАРДИОЛОГИИ МЗ РФ На правах рукописиСтафеевЮрийСергеевичВОЗДЕЙСТВИЕНАВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙСТАТУСАДИПОЦИТОВКАКПОДХОДКРЕГУЛЯЦИИИХЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИКИНСУЛИНУ03.01.04 Биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

стр. 11
латентное воспаление жировой ткани способно нарушать инсулиновуючувствительностьадипоцитов. Анализируя взаимосвязи между воспалением жировой ткани и инсулиновойчувствительностьювоспалительногоадипоцитовстатусаможноадипоцитовзаключить, является что коррекция перспективной научно- практической

стр. 61
захвата радиоактивных аналогов 3H2-дезоксиглюкозы. 2.12.Коррекциявоспалительногостатусаи инсулиновойчувствительностиадипоцитовс помощью рекомбинантного ИЛ-4 Для оценки влияния коррекциивоспалительногостатусаадипоцитовна их инсулиновуючувствительностьпроводили обработку клеток в условиях липидиндуцируемой

Оглавление диссертациикандидат наук Стафеев Юрий Сергеевич
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...............................................................6
ВВЕДЕНИЕ....................................................................................9
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................19
1.1.Инсулиновая сигнализация и ее регуляция......................................19
1.1.1. Физиологическое состояние инсулиновой сигнализации..................20
1.1.2.Обратные связи и регуляция инсулиновой сигнализации..................26
1.2.Ассоциация ожирения и латентного воспаления жировой ткани............28
1.2.1.Пусковые механизмы развития воспаления при ожирении.................28
1.2.2. Изменения иммунофенотипа жировой ткани при ожирении...............32
1.2.3.Ожирение и МСК ЖТ...............................................................35
1.3.ИЛ-4 как перспективный терапевтический агент для коррекции инсулиновой резистентности жировой ткани........................................36
1.3.1.ИЛ-4: сигнализация и физиологические эффекты............................38
1.3.2.ИЛ-4 и жировая ткань...............................................................39
1.4.Генная терапия.........................................................................40
1.4.1 .Плазмидная генная терапия.......................................................42
1.4.2. Вирусная генная терапия...........................................................44
1.5. Заключение..............................................................................46
2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ............................................................47
2.1.Клиническая характеристика пациентов, включенных в исследование .„.47
2.2.Иммуногистохимическое исследование биоптатов жировой ткани пациентов............................49
2.3.Выделение МСК из жировой ткани пациентов..................................51
2.4.Культивирование, заморозка и адипогенная дифференцировка МСК ЖТ
пациентов....................................................................................52
2.5.Оценка пролиферации МСК ЖТ пациентов......................................54
2.6.Оценка распределения по фазам клеточного цикла МСК ЖТ пациентов..54 2.7.Выделение фракции тотальной РНК из клеток..................................55
2.8.Проведение количественной полимеразной цепной реакции с обратной
транскрипцией в реальном времени....................................................56
2.9.Оценка адипогенной дифференцировки МСК ЖТ пациентов...............57
2.10.Культивирование преадипоцитов мыши 3Т3-Ь1 и их адипоцитарная дифференцировка..........................................................................58
2.11.Моделирование метаболического стресса на зрелых адипоцитах 3Т3-
Ь1..............................................................................................59
2.12. Коррекция воспалительного статуса и инсулиновой чувствительности адипоцитов с помощью рекомбинантного ИЛ-4....................................61
2.13. Создание лентивирусной конструкции, кодирующей ИЛ-4................61
2.14.Лентивирусная трансдукция зрелых адипоцитов и контроль наработки
трансгена.....................................................................................63
2.15.Оценка инсулин-индуцируемого захвата радиоактивных аналогов [ Н]-2-дезоксиглюкозы.............................................................................64
2.16.Иммуноблоттин г.....................................................................65
2.17.Иммуноцитохимическое исследование ядерной транслокации транскрипционного фактора БТЛТ6....................................................65
2.18. Анализ изменения протеома зрелых адипоцитов 3Т3-Ы при кратком и длительном действии ИЛ-4...............................................................67
2.19. Статистический анализ..............................................................68
З.РЕЗУЛЬТАТЫ.............................................................................70
3.1. Клиническая характеристика пациентов, включенных в исследование.. ..70
3.2.Подкожная и сальниковая жировые ткани пациентов с ожирением и СД2Т имеют в своем составе гипертрофированные адипоциты..........................71
3.3. Подкожная и сальниковая жировые ткани пациентов с ожирением и СД2Т имеют высокую степень инфильтрации С068-позитивными клетками........72
3.4.Подкожная и сальниковая жировые ткани пациентов с ожирением и СД2Т не имеют статистически значимых различий по числу макрофагов, экспрессирующих ССЯ7..................................................................74
3.5. Подкожная и сальниковая жировые ткани пациентов с ожирением и СД2Т имеют сниженное количество макрофагов, экспрессирующих СЭ206.........76
3.6.МСК подкожной жировой ткани пациентов с СД2Т имеют ухудшенную динамику пролиферативной активности по сравнению с МСК подкожной жировой ткани пациентов с НГТ с 24 до 96 часов наблюдения..................78
3.7.МСК сальниковой жировой ткани пациентов с СД2Т имеют ухудшенную динамику пролиферативной активности по сравнению с МСК сальниковой жировой ткани пациентов с НГТ на 72 и 96 часах наблюдения..................78
3.8.Активность стресс-активируемой киназы ЖК повышена в адипоцитах, полученных из МСК ЖТ пациентов с СД2Т..........................................80
3.9.МСК ЖТ пациентов с СД2Т имеют пониженную способность к адипогенной дифференцировке по сравнению с МСК ЖТ пациентов с
НГТ............................................................................................81
3.10.Влияние агентов, индуцирующих метаболический стресс, на инсулиновую чувствительность и воспалительный статус зрелых адипоцитов..................................................................................85
3.11. Обработка инсулинорезистентных зрелых адипоцитов 3Т3-Ы рекомбинантным ИЛ-4 в концентрации 50 нг/мл восстанавливает
инсулиновую чувствительность зрелых адипоцитов...........88
3.12.Обработка дифференцирующихся преадипоцитов 3Т3-Ы не влияет на
эффективность адипоцитарной дифференцировки...........95
3.13.3релые адипоциты 3Т3-Ы, трансдуцированные лентивирусом,
кодирующим ИЛ-4, экспрессируют и секретируют ИЛ-4.........................98
3.14.Трансдукция зрелых адипоцитов 3T3-L1 защищает зрелые адипоциты 3T3-L1 от формирования липид-индуцированной инсулиновой
резистентности............................................................................102
3.15.Обработка зрелых адипоцитов ИЛ-4 в условиях липид-индуцированной инсулиновой резистетности стимулирует транслокацию транскрипционного фактора STAT6 в ядро...................................................................105
3.16.Анализ изменения протеома зрелых адипоцитов 3T3-L1 при кратком и
длительном действии ИЛ-4.............................................................108
4.ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ...................................................111
4.1.Инсулиновая резистентности и латентное воспаление жировой ткани как следствия нарушения пролиферативного потенциала МСК ЖТ...............111
4.2. Моделирование метаболического стресса на зрелых адипоцитах 3T3-
L1........................................................................................................................114
4.3.Коррекция инсулиновой резистентности с использованием рекомбинантного ИЛ-4..................................................................117
4.4.Коррекция инсулиновой резистентности с использованием лентивируса, кодирующего ген ИЛ-4..................................................................120
4.5.Действие ИЛ-4 на зрелые адипоциты связано с активирующим фосфорилированием и ядерной транслокацией транскрипционного фактора STAT6.......................................................................................122
ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................................................125
ВЫВОДЫ....................................................................................128
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...............................................................129