Запорожець Тетяна Миколаївна. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну: роль в регуляції системи крові

Краткое описание

Запорожець Тетяна Миколаївна. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну: роль в регуляції системи крові: Дис... д-ра мед. наук: 14.03.03 / Українська медична стоматологічна академія. - Полтава, 2002. - 257, 5 арк. , табл. - Бібліогр.: арк. 224-256

Запорожець Т.М. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну:роль в регуляції системи крові.
Дисертація (рукопис) на здобуття наукового ступеня доктора біологічних наук за спеціальністю 14.03.13 - нормальна фізіологія. - Інституті фізіології ім. О.О.Богомольця НАН України, Київ, 2002.
Пептидний комплекс, отриманий шляхом ферментативного гідролізу гемоглобіну з наступною екстракцією органічною кислотою в присутності двохвалентних катіонів має власну фізіологічну активність, яка спрямована на підтримку метаболічних та регенераторних процесів у системі крові.
Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну можна віднести до медіаторної ланки біорегуляції системи крові, яка здійснює перенос специфічної інформації після взаємодії з мембранними рецепторами, змінюючи активність внутрішньоклітинних білків (зокрема bcl-2) з протеінкіназами, сигнали від яких змінюють експресію ядерних білків (зокрема р53). Виявлена здатність комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну посилювати розвиток еритробластних елементів та стимулювати процеси проліферації клітин гранулоцитарного ряду за фізіологічних умов і при розвитку експериментальних патологій. Комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну в умовах експериментальної патології системи крові (гемолітичної анемії, викликаній введенням сірчанокислого фенілгідразину, порушенні синтезу порфіринів та гему в умовах хронічної свинцевої інтоксикації, гіпопластичноїї анемії, викликаній променевим пошкодженням організму, депресії кровотворення,, викликаній введенням цитостатика) притаманна нормалізуюча дія на систему вільнорадикального окислення, білки гострої фази запалення, неспецифічну резистентність, що супроводжується відновленням фагоцитарних властивостей нейтрофілів, нормалізацією функцій системи гемостазу та імунітету. Перспективне подальше вивчення комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну, як потенційних лікарських речовин, що разом із вирішенням найважливіших теоретичних проблем біологічної регуляції дозволить накреслити нові підходи до лікування різних захворювань системи крові

В дисертації наведені теоретичні узагальнення і нове вирішення сучасної наукової проблеми в галузі фізіології по розкриттю ролі пептидних фрагментів гемоглобіну в регуляції системи крові. Результати дослідження впливу комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну на гематологічні показники, стан кісткового мозку, перекисне окислення ліпідів, гемостаз, імунітет та апоптоз гемопоетичних клітин важливі для фундаментальної фізіології і можуть бути використані як підґрунтя для створення нових лікарських засобів.
1.Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну має власну фізіологічну активність, яка спрямована на регуляцію гематологічних показників, стану кісткового мозку, перекисне окислення ліпідів, гемостаз, імунітет та апоптоз гемопоетичних клітин в умовах експериментальної патології, що підтверджує існування пептидної регуляції біологічно активними фрагментами гемоглобіну системи крові.
2. Комплекс пептидних фрагментів отримували за власною методикою шляхом ферментативного гідролізу гемоглобіну. Екстракцію гідролізату проводили за допомогою органічних кислот в присутності катіонів двохвалентних металів, з очисткою шляхом гельфільтрації для вилучення пептидів з молекулярною масою менше 10 кД. Пептидний комплекс давав позитивну біуретову реакцію з максимумом спектра поглинання 200-210 нм. За даними іонообмінної хроматографії мав шість основних фракцій, час утримання: 3, 12,18, 27, 35, 39 хвилин.
3. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну при внесенні у кров, отриману від здорових донорів, проявляв широкий спектр біологічної активності: стабілізував мембрану еритроцитів при дії солянокислого гемолітика, посилював фібринолітичну активність плазми, знижував ступінь експресії манозовміщуючих мембранних структур (МВМС) лімфоцитів та поліморфноядерних лейкоцитів.
4. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну має рецепторний тип дії, про що свідчило збільшення швидкості проведення імпульсів зорової модальності по специфічних аферентних системах підкоркових та коркових відділів зорового аналізатора, зниження експресії МВМС лімфоцитів та поліморфноядерних лейкоцитів після його введення здоровим тваринам.
5. Найбільша фізіологічна активність відмічається при застосуванні дози 1 мг/кг. У тварин відмічалось підвищення вмісту гемоглобіну, посилення розвитку еритробластних елементів, стимуляція процесів проліферації клітин гранулоцитарного ряду, підвищення фагоцитарної активності нейтрофілів.
6. Комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну в умовах експериментальної патології системи крові притаманна корегуюча дія на гематологічні показники периферичної крові і кісткового мозку, перекисне окислення ліпідів, гемостаз та неспецифічну резистентність організму.
7. При гемолітичній анемії, викликаній введенням сірчанокислого фенілгідразину комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну відновлює вміст глюкозо-6-фосфатдегідрогенази еритроцитів, нормалізує морфологічну картину крові та фагоцитарний індекс нейтрофілів, знижує значення НСТ-тесту нейтрофілів та гальмує розвиток гіперкоагуляції.
8. За умов хронічної свинцевої інтоксикації комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну прискорює розвиток компенсаційно-пристосувальних реакцій в периферичній крові та кістковому мозку, а саме: нормалізує кількість сидероцитів та активність супероксиддисмутази еритроцитів, фагоцитарну і кисеньактивуючу функцію нейтрофілів, збільшує швидкість оновлення еритроїдних елементів кісткового мозку.
9. При променевому пошкодженні комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну виявляє радіопротекторний ефект: прискорює процеси проліферації та вихід клітин гранулоцитарного ряду з депо кісткового мозку, посилює дозрівання поліхроматофільних нормобластів, зменшує рівень процесів пероксидації, відновлює фагоцитарну функцію нейтрофілів та показники гемостазу.
10. За умов гемодепресіі, яка була викликана введенням цитостатичного препарату вінбластину, комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну зменшує побічні ефекти цитостатика, запобігає мієлосупресії стимулюючи грануло- і лімфопоез, зменшує нейтрофілопенію в периферичній крові, стимулює клітинний та гуморальний імунітет, відновлює до норми фагоцитарну активність нейтрофілів. Під впливом пептидних фрагментів гемоглобіну нормалізується стан прооксидантно-антиоксидантної системи і системи гемокоагуляції.
11. Комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну можна віднести до медіаторної ланки біорегуляції системи крові, яка здійснює перенос специфічної інформації змінюючи активність внутрішньоклітинних білків bcl-2 та експресію ядерних білків р53. В умовах експериментальної патології системи крові (хронічної свинцевої інтоксикації, іонізуючому опроміненні організму, депресії кровотворення, яка була викликана введенням вінбластину) комплекс пептидних фрагментів гемоглобіну гальмує процеси апоптозу за рахунок зниження експресії протеіну р53 і збільшення експресії онкопротеїну bcl-2, зменшує фрагментацію ДНК клітин кісткового мозку.
12. Подальше вивчення дії комплексу пептидних фрагментів гемоглобіну, як потенційних лікарських речовин, дозволить накреслити нові підходи до лікування різних захворювань системи крові