Экспериментальное исследование взаимодействий кроветворных клеток с элементами стромы Паюшина, Ольга Викторовна

Короткий опис

Паюшина,ОльгаВикторовна.Экспериментальноеисследованиевзаимодействийкроветворныхклетоксэлементамистромы: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.11. - Москва, 1999. - 139 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ им. Н.К. КОЛЬЦОВА РАН На правах рукописиПАЮШИНАОльгаВикторовнаЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕИССЛЕДОВАНИЕВЗАИМОДЕЙСТВИИКРОВЕТВОРНЫХКЛЕТОКСЭЛЕМЕНТАМИСТРОМЫ03.00.11 - эмбриология, цитология и гистологоя Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный

стр. 5
кроветворныхЭтаклетокосу­ регуляция ществляется с помощью факторов роста и опосредуется стромальнымиклеткамикроветворныхорганов, создающими микроокружение для развитиякроветворныхклеток. О ролистромыв регуляциикроветворнойдифференцировки косвенно свидетельствуют такие факты, как изменение

стр. 17
этом случае зависят от добавляемых к культуре цитокинов (Tamir et al., 1989; 1990). 3. Стромальныеклетки- предшественники Вкроветворныхтканях обнаруживаютсяклетки- предшественникикроветворнойстремы. Они отличаются по физическим свойствам от 18кроветворныхклетоки могут быть отделены от них

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Паюшина, Ольга Викторовна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
I. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТВОЛОВЫХ И ЮДОНАЧАЛЬНЫХ КРОВЕТВОРНЫХ КЛЕТКАХ.
II. КРОВЕТВОРНОЕ МИКРООКРУЖЕНИЕ.И
1. Клеточный состав кроветворного микроокружения.
2. Морфологическая и функциональная неоднородность кроветворного микроокружения
3. стромальные клетки- предшественники.
4. Кроветворное микроокружение в эмбриогенезе.
III. РОЛЬ КРОВЕТВОРНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ В РЕГУЛЯЦИИ КРОВЕТВОРЕНИЯ.
1. Цитокины, участвующие в регуляции кроветворения.
1.1. Фактор стволовых клеток.
1.2. Интерлейкин-3.
1.3. Колониестимулирующие факторы.
1.4. Эритропоэтин.
1.5. Тромеопоэтин.
1.6. Особенности регуляции ранних кроветворных клеток с помощью цитокинов.
2. Продукция цитокинов клетками кроветворной стромы.
3. Значение межклеточных взаимодействий для регуляции кроветворения.
4. Механизмы межклеточных взаимодействий: роль внеклеточного матрикса и поверхностных молекул стромальных клеток.
5. Адгезия кроветворных клеток к строме и ее роль в регуляции кроветворения.
IV. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПОДХОДЫ К ИССЛЕДОВАНИЮ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В КРОВЕТВОРЕНИИ.
1. Длительные культуры кроветворных тканей.
2. Получение колоний на АЦ-мембранах.
3. Кроветворная дифференцировка эмбриональных стволовых клеток
4. Применение методов генетической инженерии в изучении регуляции кроветворения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
I. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ЖИВОТНЫЕ.
II. ОСНОВНАЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ.
1. Условия облучения.
2. Получение очагов кроветворения на подслое, образованном in vrvo.
2.1. Имплантация АЦ-мембран для формирования подслоя.
2.2. Введение суспензии костного мозга.
2.3. Предварительная фиксация подслоя.
2.4. Методика экспериментов с кровопусканием.
2.5. Использование кополимера этиленвинилацетата для доставки эритропоэтина к подслою.
2.5.1. Приготовление ЭВА.
2.5.2. Имплантация ЭВА под подслой на АЦ-мембране.
3. Получение подслоев на АЦ-мембранах in vttro.
3.1. Получение эмбрионов мыши с датированным сроком развития.
3.2. Культивирование клеток.
3.2.1. Получение эмбриональных фибробластов мыши.
3.2.2. Получение фибробластов го кожи, печени, конечностей (с костным мозгом), почки и селезенки.
3.2.3. Получение монослойных культур костного мозга.
3.2.4. Постоянные линии фибробластов.
3.2.5. Получение подслоев фибробластов на АЦ-мембранах.
3.2.6. Получение первичных монослойных культур гепатоцитов, почечного эпителия и клеток селезенки.
3.3. Имплантация подслоев мышам и введение суспензии костного мозга.
III. ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОБРАБОТКИ МАТЕРИАЛА.
1. Приготовление тотальных препаратов АЦ-мемеран.
2. Приготовление полутонких срезов и электронная микроскопия.
3. Гистохимическая реакция выявления миелопероксидазы.
IV. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
I. ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВЕТВОРЕНИЯ НА ПОДСЛОЯХ, ОБРАЗОВАННЫХ IN VITRO КЛЕШАМИ РАЗЛИЧНОЙ ПРИРОДЫ И СРОКОВ РАЗВИТИЯ.
1. Образование кроветворных колоний на подслоях эмбриональных фибробластов мыши
2. Кроветворение на подслоях фибробластов различной органной локализации.
2.1. Образование кроветворных колоний на подслоях, содержащих фибробласты костного мозга.
2.1.1. Кроветворные колонии на подслое фибробластов из конечностей 17-суточных эмбрионов и новорожденных мышей.
2.1.2. Кроветворные колонии на подслое фибробластов монослойной культуры костного мозга взрослых мышей.
2.2. Образование кроветворных колоний на подслое фибробластов кожи 17 - суточных эмбрионов и новорожденных мышей.
2.3. Образование кроветворных колоний на подслое фибробластов печени 17 -суточных эмбрионов.
2.4. Образование кроветворных колоний на подслое фибробластов почки взрослых мышей.
2.5. Образование кроветворных колоний на подслое фибробластов селезенки взрослых мышей.
3. Поддержание кроветворения первичными культурами клеток различных органов мыши.
3.1. Кроветворение на подслоях, содержащих гепатоциты эмбрионов и новорожденных мышей.
3.2. Кроветворение на подслое клеток почки новорожденных и взрослых мышей.
3.3 Кроветворение на подслое клеток селезенки взрослых мышей.
II. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ КРОВЕТВОРНОЙ ДИФФЕРЕНЦИЮВКИ ОТ СОСТОЯНИЯ СТЮМАЛЬНЫХ КЛЕТОК.
1. Использование интактных, фиксированных и обработанных бактериальным липополисахарцдом фибробластов различных клеточных линий в качестве стромальных подслоев.
1.1. Подслой клеток СЗН 10Т1/2 clone8.
1.2. Подслой клеток ДФК-3.
1.3. Подслой клеток ЗТЗ.
1.4. Подслой клеток NIH/3T3.
1.5. Подслой клеток NCTC clone L
2. Исследование кроветворения на подслое интактных и фиксированных эмбриональных фибробластов человека.
3. Исследование кроветворения на фиксированном подслое, сформированном в перитонеальной полости мыши.
4. Исследование кроветворения на фиксированном подслое, сформированном в подкожной соединительной ткани мыши.
III. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ КРОВЕТВОРНЫХ ЦИТОКИНОВ НА ПОДДЕРЖАНИЕ ГЕМОПОЭЗА ПОДСЛОЕМ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ КЛЕТОК.
1. Кроветворение на подслое перитонеальных фибробластов после кровопускания.
1.1. Исследование днфференцировки сингенных кроветворных клеток на подслое мыши после кровопускания.
1.2. Исследование днфференцировки кроветворных клеток морской свинки на подслое мыши после кровопускания.
2. Кроветворение на перитонеальном подслое в присутствии ЭВА, содержащего эритропоэтин.
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.