Хроматографическая очистка микробных пектиназ и целлюлаз и использование их при изолировании протопластов высших растений Хасирджева, Альбина Константиновна

Короткий опис

Хасирджева,АльбинаКонстантиновна.Хроматографическаяочисткамикробныхпектиназицеллюлазииспользованиеихприизолированиипротопластоввысшихрастений: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1984. - 160 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ БИОТЕХНИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ На правах рутсописи ХАСИРДЙЕВААльбинаКонстантиновнаУДК 577.152.31/321:543.544 ХР0МТ01РАФИЧЕСКАЯОЧИСТКАГЖКРОЕНЫХПЕКТИНАЗИ ЦЕЛЛКШАЗ ИИСПОЛЬЗОВАНИЕИХПРИИЗОЛИРОВАНИИПРОТОПЛАСТОВВЫСПЕ'КРАСТЕНИЙ03.00.04 - биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кацдидата

стр. 10
Созданы два новых отечественных биохимреактива - пектиназа500 и целлкшаза-ЮОО, и разработана эффективная методикаизоли­ рованияжизнеспособныхпротопластоввысшихрастенийсиспользо­ ваниемэтих црепаратов. Показано, что препаратыпектиназа-500 ицеллюлаза-ЮОО могут быть с успехом использованы вместо зарубеж­ ных аналоговпривыделении клеток ипротопластоввысшихрасте­ ний, - II ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава I....

стр. 115
активность 2450 ед/г; 2 - препаратцеллюлазылиофилизированный, активность 1050 ед/г - lie Глава 7. ИЗУЧЕНИЕ И ПОДБОР УСЛОВИЙ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХПРОТОПЛАСТОВС ПОМОЩЬЮПЕКТИНАЗЫ-ЗОО ИЦЕЛЛЮЛАЗЫ-ЮООПротопластывысшихрастенийможно выделять механическим путем (Герасимов, 1976) или ферментативным

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Хасирджева, Альбина Константиновна
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . . II
ГЛАВА I. ФЕРМЕНТАТИВНОЕ РАЗРУШЕНИЕ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ
ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
1.1. Структурные вещества клеточных стенок высших растений и характеристика ферментов, расщепляющих эти вещества . . II
1.2. Изолирование жизнеспособных протопластов растений под действием ферментных препаратов
ГЛАВА 2. ПЕКТОЛИТИЧЕСЖЕ И ЦЕЛЛШОЛИТИЧЕСКИЕ КОМПЛЕКСЫ И МЕТОДЫ ИХ ВЫДЕЛЕНИЯ
2.1. Неполитические и целлюлолитические системы у микроскопических грибов
2.2. Гель-хроматография как эффективный метод очистки белков и ферментов . . 35 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Ферментные препараты как источник получения высокоактивных комплексов пекти-назного и целлкшазного действия
3.2. Методы определения активности ферментов
3.2.1. Определение активности ферментов пектолитического комплекса
3.2.2. Определение активности целлкшаз
3.2.3. Оцределение активности ферментов, цри-сутствущих в пектиназном и целлкшазном комплексах (ксиланаза, лихениназа, ламинариназа, инвертаза, N -ацетил-^Ь- о-глю-козаминидаза, цротеаза, амилаза) . 48 3.3. Определение содержания белка, нейтральных Сахаров и цветности в ферментных препара
3.4. Методы выделения и очистки пектиназных и целлкшазных препаратов.
3.5. Методы биохимической характеристики очищенных ферментных препаратов.
3.6. Выделение растительных протопластов
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПРИЕМОВ МЬ-ХРОМАТОГРАФИИ НА АКРИЛЕКСЕ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ И ДЕЛЛЮ-ЛОЛИТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
4.1. Вдияние концентрации белков и солей на структуру зерен полиакриламидного геля в статических условиях.
4.2. Влияние вязких концентрщюванных растворов на структуру геля при хроматографии на колонках.
4.3. Изучение режима г ель-хромат ографии концентрированных ферментных растворов .для масштабирования процесса очистки
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОАКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ПЕКГИНАЗЫ ("ПЕКТИНАЗА-500") НА ОСНОВЕ ГЕЛЬ-ХРОМТОГРАФИИ
5.1. Испытание разных приемов очистки пектоли-тического комплекса из препаратов пекто-фоетидина ПЮх и пектофоетидина ГЗх
5.2. Получение высокоактивного пектолитического препарата по разным схемам и их сравнительная оценка
5.3. Характеристика компонентного состава препарата пектиназа-500 (в сравнении с пектиназой мацерозим 5-Ю)
5.4. Разделение ферментного комплекса пекти-назы-500 гель-хроматографией на ультрагеле АсА-44.
5.5. Разделение пектиназы-500 методом изоэлек-трического фокусирования и определение изоэлектрических точек отдельных компонентов
5.6. рН-зависимость эндополигалактуроназы как основного компонента пектиназного комплекса, ответственного за процесс мацерации растительной ткани
ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОАКТИВНОГО ЦЕЛЛКЖОЛИТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ("ЦЕЛЛЮЛАЗА-1000") С ПРИМЕНЕНИЕМ ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФШ 6.1. Испытание целлюлолитических препаратов целлоконингин ПЮх, целлолигнорин ШОх, целловиридин ГЗх, целлокандин ГЗх при очистке их концентрированных растворов гель-хроматографией
6.2. Получение высокоактивного целлкшолити-ческого препарата из целлокандина ГЗх по разным схемам и их сравнительная оценка
6.3. Характеристика компонентного состава препарата целлюлаза-1000 (в сравнении с целлкшазой Онозука В-10). III
6.4. Изучение влияния рН на целлкшазную активность препаратов целлюлаза-1000 и Онозука К-10 .ИЗ
6.5. Стабильность высокоактивных целлкшолити-ческих црепаратов, полученных из целло-кандина ГЗх, цри хранении
ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ И ПОДБОР УСЛОВИЙ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ ПРОТОПЛАСТОВ С ПОМОЩЬЮ ПЕКТИНАЗЫ-500 И ЦЕЛЛКЖАЗЫ-1ООО
7.1. Замена японского препарата мацерозим Е-10 на препарат пектиназа-500 в методике выделения цротопластов.
7.2. Замена японского препарата целлюлазы Онозука Е-10 на препарат целлкшаза-1000 цри выделении протопластов
7.3. Получение жизнеспособных растительных протопластов с помощью двух препаратов -пектиназы-500 и целлкшазы-ЮОО