Селекция и конструирование штаммов молочнокислых бактерий, перспективных для использования в пробиотиках Карпушина, Светлана Григорьевна

Короткий опис

Карпушина,СветланаГригорьевна.Селекцияиконструированиештаммовмолочнокислыхбактерий,перспективныхдляиспользованиявпробиотиках: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Москва, 1999. - 156 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ь Щ НАУЧН0-ИССЛЕД0ВАТЕЛЬС1аИЙ'ИНСТИТУТ Г Е Н Е Т И К И ИСЕЛЕКЦИИПРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ (ГНИИГЕНЕТШСА) Н А ПРАВАХ РУКОПИСИ КАРПУПШНАСВЕТЛАНАГРИГОРЬЕВНАСЕЛЕКЦИЯИКОНСТРУИРОВАНИЕШТАММОВМОЛОЧНОКИСЛЫХБАКТЕРИЙ,ПЕРСПЕКТИВНЫХДЛЯИСПОЛЬЗОВАНИЯВПРОБИОТИКАХ(03.00.15

стр. 8
препарата на основе одного из вновь выделен­ ных штам1-лов, а такжеконструированиес помоц^ю генно-инженерных ме­ тодов новыхштаммовмолочнокислыхбактерий,перспективныхдлявклю­ чения в составпробиотиков. В соответствий ментальные задачи: -, выделить и идентифицировать молочнош-хчслыебактериииз

стр. 97
сведена к минимуму опасность диссеминации рекомбинантной плазмиды в природе при широ­ комасштабномиспользованииштаммов, 3.4,2, Оптимизация процесса конъюгативной мобилизациимолочнокислыхбактерийв клеткиДляосуществления конъюгативной мобилизации плазмид в клетки мо-^ лочнокислыхбактерийс наибольшей

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Карпушина, Светлана Григорьевна
ВВЕДЕНИЕ.
Глава i. ЖТЕРАТУРНУЙ ОБЗОР 1.1, Пообиотики.
X , j. , я
Л, Роль кишечной микрофлоры в функционировании организма животных ,,,,,,,,.
1.2. Общая характеристика и свойства пробиотиков.
1,1.3. Получение пробиотиков на основе микроорганизмов - симбионтов пищеварительного тракта.
1.2. Бифидобактерии как важнейшие обитатели желудочно-кишечного тракта и важнейший компонент пробиотиков,.
1.3. Лактобациллы.
1.3.1. Таксономия лактобацилл и их биологические свойства.,
1.3.2. Антагонистическая -активность лактобацилл и других молочнокислых бактерий.
1.3.3. Антибиотикорезистентность лактобацилл,.
1.3.4. Лактобациллы как объект генетических манипуляций.,.,,,,,.
1.3.4.1, Плазмиды лактобацилл.,,.
1.3.4.2, Репликация плазмид лактобацилл,.,«.,,,.,.
1.3.4.3, Векторы для лактобацилл.
1.4. Конъюгация у бактерий.,.,,.37s
1.4.1. Механизмы конъюгации у грамотрицательных бактерий.
1.4.2. Конъюгативный перенос плазмид в клетки грамположителъных бактерий.
1.4.3. Конъюгативная мобилизация, аяЦЮ 41 "w ¿"1 j?'J. k^f зл£ааазааааа**лаз**е*жа*а*а*ла£лааа*Алаааааал**аг*лааяаз /
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Бактериальные штаммы, плазмиды.
2.2. Среды и антибиотики.
3. Выделение и щентификация молочнокислых бактерий.
2.4. Определение численности молочнокислых бактерий в пробиоти-ческом препарате.
2.5. Определение антагонистической активности молочнокислых бактерий.
2.8. Определение титруемой кислотности молочнокислых бактерий.
2.7. Определение устойчивости молочнокислых бактерий к поваренной соли и желчи.
2.8. Определение устойчивости молочнокислых бактерий к фенолу.
2.9. Исследование биохимической активности молочнокислых бактерий
2.10. Определение спектра кислых метаболитов, образуемых бифидо-бактериями ив глюкозы.
11. Выделение плазмидной ДНК из Е. coli.
12. Выделение плазмидной ЛНК из лактобаиилл и энтерококков.
2.13. Трансформация Е. ооП плазмидной ДНК.
2.14. Манипуляции с ДНК.
2.15. Процедура скрещивания.
2.16. Определение порога, устойчивости к действию антибиотиков
2.17. Определение сегрегационной стабильности плазмид.
2.18. /Индукция мутаций под действием нитрозогуанидина.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ й ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение, идентификация и изучение некоторых биологических свойств лактобаиилл из кишечника•пушных зверей.
3.1.1. Выделение штаммов молочнокислых бактерий из' содержимого желудочно-кишечного тракта пушных зверей.
3.1.2. Исследование биологических признаков выделенных штаммов лактобацилл. 3.1,2,1. Исследование клеточной морфологии, окраски по Граму, формы колоний и определение наличия каталазы.
3.1.2.2. Определение способности к росту при различных температурах
3.1.2.3. Определение видовой принадлежности исследуемых штаммов лактобацилл на основании их способности образовывать кислоты из различных углеводов.
3.1.3. Исследование физиологических и культуральных признаков выделенных штаммов лактобацилл.
3.1.3.1. Определение титруемой кислотности.
3.1.3.2. Определение чувствительности (устойчивости) к различным концентрациям фенола.поваренной соли и желчи.
3.1.3.3. Определение антагонистической активности исследуемых штаммов лактобацилл.-.,.
3.1.3.4. Определение чувствительности (устойчивости) к антибиотикам исследуемых штаммов лактобацилл.
3.1.3.5. Изучение роста исследуемых штаммов лактобацилл при культивировании их в ферментере.
3.1.3.6. Определение ксероустойчивости.
3.1.4. Характеристика штамма Lactobacillus acidophilus ЗП7.
3.2, Разработка, производство и испытания нового пробиотического препарата, на основе штамма Lactobacillus acidophilus ЗП7 (ВКШ Б-6535).'.,.,.
3.2.1, Обоснование потребности разработки нового пробиотического. ■поелаюата.
3.2.2. Описание технологического процесса производства и харак-•
- о териотика Энтерацида П.
3.2.3. Испытание опытной партии Энтерацида П.
3.3. Выделение, идентификация и изучение некоторых биологических свойств бифидобактерий из кишечника человека.■ 84.
3.3.1. Разработка новых сред для выделения и культивирования бифидобактерий.
3.3.2. Определение видовой принадлежности изолятов бифидобакте-. рии на основании их способности образовывать кислоты из различных углеводов.
3.3.3. Чувствительность изолятов бифидобактерии к антибиотикам.
3.3.4. Образование изолятами бифидобактерий муравьиной и уксусной кислоты из глюкозы.
3.3.5. Антагонистическая активность супернатантов культуральных жидкостей бифидобактерий.
3.4. Получение штаммов молочнокислых бактерий, устойчивых к антибиотикам.
3.4.1, Безопасность мобилизуемых векторов семейства pi.Fl 311.
3.4.2. Оптимизация процесса конъюгативной мобилизации в клетки молочнокислых бактерий.
3.4.ЕЛ. Определение эффективности "двойных" и "тройных" конъюгационных скрещиваний.
3.4.2.2. Увеличение эффективности переноса плазмид в клетки молочнокислых бактерий за счет использования мембранных фильт-оов,.;.,,.,.
3.4.2.3. Подбор оптимальной неселективной питательной среды, для совместного выращивания донорных и реципиентных клеток.
3.4.2.4/ Варьирование соотношения донор-реципиент.
3,4.2.5. Оптимизация времени совместного инкубирования донорных
- б реципиентных клеток.
3.4.3. Конъюгативная мобилизация плазмиды PLF21 в клетки молочнокислых бактерий. 10S
3.4.3.1, Изучение структурной стабильности плазмиды pLF£l в клетках молочнокислых бактерий,. 104.
3.4.3.2, Изучение сегрегационной стабильности плазмиды pLF21 в клетках молочнокислых бактерий, . i.
3.4.3.3, Определение порога устойчивости молочнокислых бактерий, несущих плазмиду pLF21. к хлорамшениколу.
3.4.4. Конъюгационная мобилизация плазмид. несущих ген Ь-лакта-мазы в клетки молочнокислых бактерий,.
3.4.4.1. Конъюгативная мобилизация плазмиды pLFAl в клетки молочнокислых бактерий.,,,,.,.
3.4.4.2. Конструирование плазмидного вектора pLFAo.
3.4.4.3. Конъюгативная мобилизация плазмиды pLFA5 в клетки молочнокислых бактерий.
3,5, Клонирование гена соматолиберина в молочнокислых бактери-. ях .не
3.5.1, Клонирование гена соматолиберина. в клетках Е, coli.
3.5.2. Клонирование гена соматолиберина в молочнокислых бактериях и экспрессия пептида, в системе грамположительных бак-теоий.,.,,.,.,.,,.