Иммунохимический анализ конформационных изменений и наследственных нарушений экспрессии гликопротеидов IIb-IIIa тромбоцитов человека Хаспекова, Светлана Георгиевна

Краткое описание

Хаспекова,СветланаГеоргиевна.ИммунохимическийанализконформационныхизмененийинаследственныхнарушенийэкспрессиигликопротеидовIIb-IIIaтромбоцитовчеловека: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1998. - 133 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКИЙ КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ КОМПЛЕКС МЗ МП РФ НИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КАРДИОЛОГИИ На правах рукописиХАСПЕКОВАСветланаГеоргиевнаИММУНОХИМИЧЕСКИЙАНАЛИЗКОНФОРМАЦИОННЫХИЗМЕНЕНИЙИНАСЛЕДСТВЕННЫХНАРУШЕНИЙЭКСПРЕССИИГЛИКОПРОТЕИДОВПЬ-ШаТРОМБОЦИТОВЧЕЛОВЕКА03.00.04. - биохимия

стр. 4
ИсследованиенарушенийэкспрессииГП ПЬ-П1а при тромбастении Гланцманна 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 80 92 5.1.ИммунохимическийанализконформационныхизмененийГП ПЬШа с помощью MOHO A T 92 5.1.1. Характеристикаконформационнозависимого моноАТ CRC54 .92 5.1.2.Конформационныеизменениякомплекса ГП ПЬ-Ша при адгезиитромбоцитов5.1.3.Измененияконформационнозависимых эпитопов 95 после 96 обработки...

стр. 91
отдельных компонентов в лизатетромбоцитовопределяли с помощью сэндвич иммуноферментногоанализа(рис. 17 и 19). 91 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 5.1.ИммунохимическийанализконформационныхизмененийГП ПЬШа с помощью моноАТ. 5,1.1. Характеристикаконформационнозависимого моноклопального антитела CRC54.

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Хаспекова, Светлана Георгиевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
1. ВВЕДЕНИЕ.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Структура и функциональные реакции тромбоцитов.
2.2.Характеристика главных мембранных гликопротеидов тромбоцитов человека.
2.3. Комплекс гликопротеидов ПЬ-Ша (аПЬ|33-интегрин).
2.3.1. Семейство интегринов.
2.3.2. Структура и особенности функционирования комплекса ГП ПЬ-Ша.
2.3.3. Механизмы проведения активирующих сигналов через ГП ПЬ-Ша.
2.3.4. Использование моноклональных антител против ГП ПЬ-Ша в изучении конформационных изменений комплекса ГП ПЬ-Ша.
2.4. Тромбастения Глацманна - наследственные нарушения экспрессии ГП ПЬ-Ша.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1.Реактив ы.
3.2. Методы.
3.2.1. Выделение тромбоцитов.
3.2.1.1. Получение обогащенной тромбоцитами плазмы.
3.2.1.2. Получение отмытых тромбоцитов.
3.2.1.3. Получение фиксированных тромбоцитов.
3.2.1.4. Мечение тромбоцитов 51Сг.
3.2.2. Моноклональные антитела.
3.2.2.1. Скрининг моноклональных антител.
3.2.2.2. Получение препаративных количеств мономоноАТ.
3.2.2.3. Получение Fab фрагментов IgG.
3.2.2.4. Иммунопреципитация.
3.2.2.5. Иммуноблоттинг.
3.2.4. Связывание антител с тромбоцитами.
3.2.4.1. Мечение белков с помощью I.
3.2.4.2. Связывание с тромбоцитами моноАТ и Fab фрагментов.
3.2.4.3. Связывание моноклональных антител с тромбоцитами, адгезированными на пластике.
3.2.4.4. Связывание фибриногена с тромбоцитами.
3.2.4.5. Связывание ГП Ilb-IIIa из лизата тромбоцитов с иммобилизованными антителами.
3.2.4. Функциональные тесты тромбоцитов.
3.2.4.1. Адгезия тромбоцитов.
3.2.4.2. Агрегация тромбоцитов.
3.2.4.3. Секреция из плотных гранул тромбоцитов.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
4.1. Характеристика моноклонального антитела CRC54.
4.1.1. Определение антигена моноАТ CRC54.
4.1.2. Локализация эпитопа CRC54 в ГП Ilb-IIIa.
4.1.3. Связывание моноАТ CRC54 с ГП Ilb-IIIa в различных конформационных состояниях.
4.1.3.1. Связывание CRC54 с ГП Ilb-IIIa на поверхности тромбоцитов в присутствии ЭДТА.
4.1.3.2. Связывание моноАТ CRC54 с LIBS-эпитопом ГП Ilb-IIIa.
4.1.3.3. Связывание Fab фрагментов моноАТ CRC54 с ГП Ilb-IIIa.
4.1.4. Сравнение эпитопа CRC54 с эпитопами других известных конформационно зависимых антител.
4.2. Исследования конформационных изменений в комплексе ГП Ilb-111а с помощью антител, направленных против конформационно зависимых эпитопов.
4.2.1. Связывание конформационно зависимых антител с тромбоцитами, адгезированными на пластик.
4.2.2. Связывание ГП Ilb-IIIa из лизата тромбоцитов с иммобилизованными моноАТ.
4.3. Исследование конформационных изменений комплекса ГП Ilb-IIIa, индуцируемых связыванием с конформационно зависимым антителом CRC54.
4.3.1. Агрегация тромбоцитов, индуцированная CRC54.
4.3.2. СЯС54-зависимое связывание тромбоцитов с лигандами ГП Ilb-IIIa.
4.3.2.1. Связывание фибриногена с тромбоцитами в суспензии.
4.3.2.2. Влияние CRC54 на адгезию тромбоцитов к фибриногену и фибронектину.
4.3.3. Изучение конформационных изменений, индуцированных CRC54, с помощью других конформационно зависимых антител.
4.4. Исследование нарушений экспрессии ГП Ilb-IIIa при тромбастении
Гланцманна.
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
5.1. Иммунохимический анализ конформационных изменений ГП Ilb-IIIa с помощью моноАТ.
5.1.1. Характеристика конформационно зависимого моноАТ CRC
5.1.2. Конформационные изменения комплекса ГП Ilb-IIIa при адгезии тромбоцитов.
5.1.3. Изменения конформационно зависимых эпитопов после обработки тромбоцитарной мембраны детергентами.
5.2. Стимуляция конформационных изменений комплекса ГП ПЬ-Ша и агрегации тромбоцитов антителом С11С54.
5.2.1. Влияние СЯС54 на агрегацию тромбоцитов.
5.2.2. Активирующее влияние СЯС54 на комплекс ГП ПЬ-Ша.
5.2.3. Регистрация конформационных изменений комплекса ГП ПЬ-Ша.
5.3. Изучение дефекта ГП ПЬ-Ша при тромбастении Глацманна с помощью моноклональных антител.