Исследование фосфорилирования Na, К-АТФазы протеинкиназой А Муртазина, Диляра Ахметалимовна

Краткое описание

Муртазина,ДиляраАхметалимовна.ИсследованиефосфорилированияNa,К-АТФазыпротеинкиназойА: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1999. - 127 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
м о с к о в с к и й ГОСУДАРСТВЕЬШЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА На правах рукописиМУРТАЗИНАДИЛЯРААХМЕТАЛИМОВНА УДК 577.152ИССЛЕДОВАНИЕФОСФОРИЛИРОВАНИЯNa,K-ATФaзыПРОТЕИНКИНАЗОЙА 03.00.04-биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Старший

стр. 2
Ка,К-АТФазыРегуляция количества молекул На,К-АТФазыв клетке 4.5. Краткосрочная регуляция активности Ка,К-АТФазыФосфорилированиеМа,К-АТФазыпротеинкиназами4.6. Белки, взаимодействующие с На,К-АТФазойАнкирин Взаимодействие анкирина с На,К-АТФазой29 30 30 33 33 36 .......38 .....39 2 Лектины и их

стр. 6
активности Ма,К-АТФазыможет осуществляться за счет вовлечения этого фермента в классические пути передачи сигнала в клетке, а именно: за счетфосфорилированияпротеинкиназами. Выяснение того, какфосфорилированиевлияет на активность Ма,К-АТФазы, а также как оно зависит от действия различных эндогенных факторов

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Муртазина, Диляра Ахметалимовна
Содержание
Список сокращений
Введение
Обзор литературы
1. Общая характеристика К-АТФазы
2. Структура Ма,К-АТФазы
2.1. Субъединичный состав фермента
2.2. Структурная организация а-субъединицы
Первичная структура, изоформы
Топография а-субъединицы
Структура цитоплазматического домена. Организация активного
центра Иа.К-АТФазы
Структура катион-связывающих центров
2.3. Структурная организация Р-субъединицы
2.4. Четвертичная структура К-АТФазы
3. Механизм функционирования К-АТФазы
3.1. Общая характеристика реакции, катализируемой №,К-АТФазой
Субстратная специфичность Ыа,К-АТФазы
3.2. Частные реакции, обеспечиваемые №,К-АТФазой
Окклюдированные катионы
Основные конформационные состояния Иа,К-АТФазы
3.3. Модифицирующее действие АТФ на Ыа,К-АТФазу
4. Механизмы регуляции активности ЫаД-АТФазы
4.1. Участие Ыа,К-АТФазы в осуществлении различных функций клеток
животных
4.2. Изоферменты Ыа,К-АТФазы и их свойства
4.3. Регуляция активности 1Ма,К-АТФазы за счет взаимодействия с липидным бислоем мембраны
4.4. Долгосрочная регуляция активности ИаД-АТФазы
Регуляция количества молекул Иа,К-АТФазы в клетке
4.5. Краткосрочная регуляция активности Ыа,К-АТФазы
Фосфорилирование Ма,К-АТФазы протеинкиназами
4.6. Белки, взаимодействующие с ИаД-АТФазой
Анкирин
Взаимодействие анкирина с Ма,К-АТФазой
Пектины и их влияние на активность Ыа,К-АТФазы
Мелиттин
Цель и задачи исследования
Материалы и методы
Материалы
Получение имидазолъной формы АТФ
I. Препаративные методы
1. Получение очищенного препарата Ыа, К-АТФазы из солевых желез утки
2. Выделение каталитической субъединицы ПКА
Получение холофермента ПКА
Получение каталитической субъединицы ПКА
3. Выделение анкирина из эритроцитов крупного рогатого скота
4. Получение фракции микросом Н,К-АТФазы из слизистой оболочки желудка кролика
П. Аналитические методы
1. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии ДСН-Иа
2. Вестерн-блоттинг
3. Иммунохимическая идентификация белков, иммобилизованных на нитроцеллюлозной мембране
4. Аффинная очистка моноклональных антител на протеинА-сефарозе
5. Определение концентрации белка
6. Определение активности Nа,К-АТФазы
7. Определение активности каталитической субъединицы ПКА
8. Фосфорилирование очищенного препарата N0, К-АТФазы из солевых желез утки под действием ПКА
9. Определение стехиометрии фосфорширования а-субъединицы Nа,К-АТФазы под действием ПКА
10. Авторадиография
11. Включение флуоресцеинизотиоцианата (ФИТЦ) в препараты Ыа,К- и Н,К-АТФазы
12. Измерение флуоресценции ФИТЦ-меченых препаратов Ыа,К- и Н,К-АТФаз
13. Анализ фосфоаминокислот
14. Определение количества гидролизованной АТФ
15. Кинетический анализ ингибирующего действия мелиттина
Результаты и их обсуждение
1. Фосфорилирование а-субъединицы К-АТФазы из солевых желез утки под действием ПКА
2. Подбор условий для фосфорилирования активной Ка,К-АТФазыиз солевых желез
утки под действием ПКА
3. Анализ фосфоаминокислот при фосфорилировании Иа,К-АТФазы из солевых желез утки ПКА
4. Влияние фосфорилирования №,К-АТФазы под действием ПКА на ее активность
5. Фосфорилирование Н,К-АТФазы из слизистой оболочки желудка кролика под действием ПКА
6. Образование комплекса анкирин-№,К-АТФаза и его фосфорилирование под действием ПКА
7. Взаимодействие мелиттина с Ыа,К-АТФазой
8. Влияние антител против (3-субъединицы и конканавалина А на фосфорилирование
Иа,К-АТФазы под действием ПКА
Заключение
Выводы
Список литературы