Изучение биосинтеза трансферрина в печени крыс Тимченко, Николай Александрович

Краткое описание

Тимченко,НиколайАлександрович.Изучениебиосинтезатрансферринавпеченикрыс: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Ленинград, 1983. - 170 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ее АКАДЕМИЯ МЕдаЩИНСКИХ НАУК СССР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕЩЩИНЫ * (^^'ТИМЧЕНКОНиколаиАлександровичИЗУЧЕНИЕБИОСИНТЕЗАТРАНСФЕРРИНАВПЕЧЕНИКРЫСЫ03,00*04 - биологическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель:

стр. 4
Глава б. 6.1, 6.2. Глава 7, . 7.1. 7.2. 7.3. Характеристика полирибосомпечени, синтезируюп^ихтрансферринОбщая характеристрша полирибосомкрысы. . 14олунохшлическая идентификация Тфсинтезирующих полирибосомпеченикрысы. . 82 82 87 Информационная РНКтрансферрина96 Выделение мРНКтрансферрина96 Гомогенность

стр. 9
которые выносятся на защиту; I.Биосинтезтрансферрина(Тф) локализован на полирибосомах, связанных с мембранами эндоплазматичес^сого ретикулумапеченикрысы* Размер Тф-синтезирующих полисом равен II-I3 рийосой-мо­ номеров на I молекулу Тф-мРНК. 2* Изпеченикрысметодами непрямой иммунопреципитации и хрома­

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Тимченко, Николай Александрович
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЖГЕРАГУРЫ.
Глава I, Биологическая роль трансферрина и строение его молекулы
Глава 2. Биосинтез трансферрина и его регуляция
Глава 3. Молекулярная организация гена трансферрина птиц.
ЭКСПШЖНГАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 4. Материалы и методы
4.1. Выделение и характеристика трансферрина
4.2. Получение ^-характеристика моноспецифических антител против трансферрина
4.3. Получение радиоактивных ■^1-иммуноглобулинов.
4.4. Выделение и фракционирование полирибосом из печени крысы.
4.5. Связывание х и1-антител с полирибосомами
4.6. Анализ полирибосом, синтезирующих трансферрин.
4.7. Выделение высокоочищенной мРНК трансферрина
4.7.1. Выделение суммарных полирибосом печени крысы.
4.7.2. Непрямая иммунопреципитация Тф-синтезирующих полирибосом.
4.7.3. Выделение суммарной РНК из Тф-синтезирующих полисом.
4.7.4. Выделение поли/А/~содержащей РНК
4.8. Мечение препаратов Тф-мРНК изотопом
4.9. Определение молекулярного веса Тф-мРНК
4.10» Определение размеров поли/А/последовательности в Тф-мРНК.
4.11. Анализ вторичной структуры Тф-мРНК
4.12. функциональная характеристика Тф-мРНК
4.12.1. Бесклеточная трансляция мРНК трансферрита
4.12.2. Обратная транскрипция Тф-мРНК.
4.13. Гибридизация РНК-Тф-кДНК.
4.14. Клонирование фрагментов структурного гена трансферрина.
4.14.1. Конструирование рекомбинантных плазмид на основе рВИ
4.14.2. Трансформация клеток рекомбинантными плазмидами
4.14.3. Гибридизация колоний с Р^-Тф-кДНК
4.14.4. Выделение рекомбинантных плазмид
4.14.5. Рестрикциюнный анализ рекомбинантных плазмид
4.15. Перенос ДНК на фильтры и гибридизация с Тф-кДНК.
4.16. Идентификация Тф-мРНК гибридизацией с рекомбинантными ДНК из плазмид рНТГ
4.16.1. Электрофорез РНК в 1,5$ агарозе с
6% формальдегидом.
4.16.2. Перенос РНК на нитроцеллюлозный фильтр
4.16.3. Ник-трансляция ДНК плазмид рНТГ
4.16.4. Гибридизация РНК, иммобилизованной на нитроцеллюлозном фильтре, с ник-транслированной ДНК плазмид рЕТ£
4.16.5. Выделение мРНК трансферрина гибридизацией с рекомбинантными ДНК плазмид
Глава 5. Выделение и характеристика трансферрина плазмы крови крыс.
5.1. Выделение трансферрина.
5.2. Оценка гомогенности препаратов трансферрина
5.3. Получение и характеристика антител к Тс
Глава б. Характеристика полирибосом печени, синтезирующих трансферрин
6.1. Общая характеристика полирибосом крысы
6.2. 14шунохимическая идентификация Тф-синтезирующих полирибосом печени крысы
Глава 7, . Информационная РНК трансферрина.
7.1. Выделение мРНК трансферрина.
7.2. Гомогенность и размеры молекулы Тф-мРНК
7.3. Размеры поли/А/-последовательностей в мРНК трансферрина.
7.4. Вторичная структура трансферриновой мРНК
7.5. функциональная характеристика мРНК трансферрина
7.5.1. Характеристика продукта бесклеточной трансляции Тф-мРНК.
7.5.2. Влияние рзЛ на трансляцию мРНК трансферрина
7.5.3. Синтез и характеристика ДНК, комплементарной мРНК трансферрина.
7.6. Кинетика гибрцдизации кДНК с различными фракциями РНК.III
Глава 8. Клонирование кДНК трансферрина крысы
8.1. Синтез рекомбинантных ДНК, содержащих последовательности Тф-кДНК
8.2. Рестрикционный анализ рекомбинантных плазмид
8.3. Идентификация Тф-мРНК блотинг-гибридизацией с ник-транслированной ДНК плазмид pRTf
8.4. Трансляция Тф-мРНК, выделенной гибридизацией с рекомбинантными ДНК.
ОБСЗОЯДЕНРЗЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОД!.
СПИСОК ВДТИРУЕШЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
СШЮОК 11РИНЯТЧХ СОКРАЩАЙ кДНК - комплементарная ДНК п.н, - пара нуклеотидов поли/А/ - полиадениловая кислота поли(U) - полиуридиловая кислота т.п.н, - тысяча пар нуклеотидов
ТйлЕД - тетраметилэтилендиамин
Теп - транс феррин
ТХУ - трихлоруксусная кислота
ЭДТА - этилецциаминтетраацетат