Изучение условий биосинтеза, выделения и свойств рестриктазы Sal Gl из Streptomyces albus G Ла Сын Рён, 0

Краткое описание

ЛаСынРён.Изучениеусловийбиосинтеза,выделенияисвойстврестриктазыSalGlизStreptomycesalbusG. : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1985. - 127 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ На правах рукописи ЛаСынРёнУДК. 577. 155. 2 (043.3)ИЗУЧЕНИЕУСЛОВИЙБИОСИНТЕЗА,ВЫДЕЛЕНИЯИСВОЙСТВРЕСТРЖТАЗЫSalGI ИЗStreptomycesalbusG. Специальность Бдохймйя 03. 00. 04 Диссертация на сойсканйе учёной степени кандидата биологических наук Научные руководителя : доктор

стр. 7
короткое время. Поэтому большое научное и практическое значение имеют исследования по поиску продуцентоврестриктаз,изучениюусло­ вийихвыделенияи очистки. В настоящее время, несмотря на то, что известно большое количестворестриктаз, применяемых в генной инженерии, ихсвойстванедостаточно изучены. Также

стр. 8
настоящей работы являлосьизучениефакторов, влияю­ щих на накоплениерестриктазыиз ее биомассырестриктазысвойств. Для достижения поставленной цели необходхшо было решить следующие задачи: -изучениевлияния фазы роста на содержаниерестриктазыSalGI в биомассе; - оптимизация состава питательной

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Ла Сын Рён, 0
ВВЕДЕНИЕ .б
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Явление рестрикции-модификации
1.2. Номенклатура и классификация ферментов систем рестрикции-модификации
1.3. Рестриктазы I типа.
1.3.1. Специфичность ферментов I типа
1.3.2. Взаимодействие ферментов I типа с ДНК.
1.4. Ферменты рестрикции-модификации Ш типа.
1.4.1. Специфичность ферментов Ш типа
1.4.2. Механизм действия ферментов Ш типа
1.5. Рестриктазы П типа
1.5Л. Специфичность рестриктазы П типа.
1.5.2. Свойства ферментов рестрикции П типа
1.5.3. Влияние условий культивирования и состава среды на содержание рестриктаз в биомассе.
1.5.4. Выделение и очистка рестриктаз П типа
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Аппаратура
2.2. Материалы
2.3. Бактериальные штаммы и бактериофаг
2.4. Среды
2.5. Использованные в работе буферные растворы.
2.6. Получение ДНК бактериофага
2.7. Выращивание и разрушение мицелия штамма s. albus G для выделения рестриктазы
2.8. Применение математических методов планирования экспериментов
2.9. Электрофорез ДНК
2.10. Определение активности рестриктазы
Sal gi
2.11. Определение концентрации белка
2.12. Приготовление 10% (об./об.) раствора полиэтиленимина
2.13. Подготовка сорбентов для колоночной хроматографии
2.I4-. Очистка рестриктазы Sal gi
2.15. Оценка неспецифических нуклеаз
2.16. Электрофорез белков
2.16.1. Электрофорез в денатурирующих условиях
2.16.2. Электрофорез нативных белков
2.17. Определение молекулярной массы методом гель-фильтрации
2.18. Изоэлектрическое фокусирование
2.19. Определение оптимальных условий для эндонуклеазной реакции
2.20. Определение Km и Vmecc
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изучение условий культивирования.643.1Л. Исследование влияние фазы роста на содержание рестриктазы sal gi в биомассе. 643.1.2. Оптимизация состава питательной среды математическими методами планирования эксперимента
3.2. Исследование условий осаждения ДНК
3.2.1. Фракционирование рестриктазы sal gi и белка стрептомицин-сульфатом
3.2.2. Фракционирование рестриктазы sai gi и белка полиэтиленимином
3.3. Исследование условия фракционирования сернокислым аммонием белка и рестриктазы Sal gi
3.4. Выделение и очистка рестриктазы
Sal GI 3.4.1. Получение суспензии белков и фермента
3.4.2. Хроматография рестриктазы Sai gi на фосфоцеллюлозе PII
3.4.3. Хроматография рестриктазы Sai gi на ДЭАЭ-трисакриле
3.4.4. Хроматография рестриктазы sai gi на гепаринсефарозе
3.4.5. Исследование чистоты ферментного препарата
3.4.5.1. Чистота препарата рестриктазы
Sal GI
3.4.5.2. Определение электрофоретической гомогенности
3.5. Физико-химические и каталитические свойства рестриктазы Sai gi
3.5.1. Молекулярная масса
3.5.2. Определение изоэлектрической точки
3.5.3. Исследование влияния различных факторов на активность фермента
3.5.3.1. Изучение условий оптимальных для проявления активности рестриктазы
Sal GI
- 4 - Стр.
3.5.3.2. Влияние концентрации субстрата на скорость его расщепления рестриктазой Sal GI
3.5.3.3. Изучение влияния ионов двухвалентных металлов на активность рестриктазы Sal gi
ВЫВОДЫ . ЮЗ