Клеточная интернализация экспрессионных генноинженерных конструкций при помощи лактоферрина Синогеева, Наталья Ивановна

Краткое описание

Синогеева,НатальяИвановна.Клеточнаяинтернализацияэкспрессионныхгенноинженерныхконструкцийприпомощилактоферрина: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Санкт-Петербург, 1999. - 151 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ^КАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины На правах рукописиСиногееваНатальяИвановнаКЛЕТОЧНАЯИНТЕРНАЛИЗАЦИЯЭКСПРЕССИОННЫХГЕННОИНЖЕНЕРНЫХКОНСТРУКЦИЙПРИПОМОЩИЛАКТОФЕРРИНАСпециальность: 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой

стр. 4
животных содержащими ЛФ комплексами 97 .102 105 105 105 107 109 110 10.1. Доставка маркерных геновприпомощивнутривенного введения в составе комплексов с К-1 ПО 10.1.1. Доставка pCMVApo-Alприпомощивнутривенного введения в составе комплексов с К-1 10.1.2. Доставка pEGFPC-3, pCMVLacZприпомощивнутривенного

стр. 82
исследование, посвященное изучениюклеточнойинтернализациирепортерных геновприпомощиЛФ, состоит из 4 частей: 1. Характеристика ЛФ человека, получение

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Синогеева, Наталья Ивановна
ОГЛАВЛЕНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.;.
Глава I. Генная терапия - универсальный способ лечения различных заболеваний.
Глава И. Рецепторные пути переноса генетического материала.
Глава III. Химические методы для синтеза коньюгатов на основе белков-лигандов и белоксвязывающих соединений.
Глава IV. Невирусные способы доставки генетического материала.
Глава V. Лактоферрин.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Глава VI. Материалы и методы исследования.
6.1. Трансформация Е. coli.
6.2. Выделение плазмидной ДНК.
6.3. Получение ЛФ.
6.3.1. Выделение и очистка ЛФ.
6.3.2. Насышение ЛФ ионами железа.
6.4. Синтез производных ЛФ.
6.4.1. Получение иодуксусного ангидрида.
6.4.2. Синтез К-1.
6.4.3. Синтез К-2.
6.5. Электрофорез в неденатурирующих условиях.
6.6. Электрофорез в денатурирующих условиях.
6.7. Получение и характеристика моноспецифических антител против ЛФ.
6.8. Ракетный иммунофорез.
6.9. Иммуноблоттинг.
6.10. Получение препаратов ЛФ, меченных 1251.
6.11. Измерение радиоактивности органов крыс после введения 1251-[К-1].
6.12. Ретардация комплексов в агарозном геле.
6.13. Определение констант диссоциации комплекса ЛФ и плазмидной ДНК.
6.14. Определение влияния солей на комплексообразование ЛФ и его производных с плазмидной ДНК.
6.15. Лазерная корреляционная спектроскопия.
6.16. Условия трансфекции клеточных культур.
6.16.1. Приготовление трансформирующих комплексов.
6.16.2. Трансформация клеток НерС2 плазмидой рСМУЬас2 в составе комплексов с ЛФ.
6.16.3. Трансформация клеток НерС2 плазмидой рСМУСа1 в составе комплексов с ЛФ.
6.16.4.Трансформация миобластов С2С12 плазмидой рСМУЬис в составе комплексов с ЛФ.
6.17. Условия трансфекции животных.
6.17.1. Условия внутривенной трансфекции крыс комплексом рСМУароА1/К-1.
6.17.2. Условия внутривенной трансфекции мышей комплексом рЕОЕРС-3/К-1.
6.17.4. Условия внутримышечной трансфекции мышей комплексами плазмидная ДНК/ЛФ.
6.18. Определение накопления продуктов экспрессии после трансфекции животных.
6.18.1. ПЦР-анализ после внутривенной трансфекции крыс комплексом рСМУароА1/К-1.
6.18.2. Определение накопления продукта экспрессии в гомогенатах органов после внутривенной трансфекции мышей комплексами рЕОРРС-3/К-1.
6.18.3. Определение накопления продукта экспрессии в гомогенатах органов после внутримышечной трансфекции мышей комплексами рЕОРР-СЗ/ЛФ и рСМУЬасг/ЛФ.
6.18.4. Определение накопления (3-галактозидазы в целых мышцах после внутримышечной трансфекции мышей комплексами рСМУЬасг/ЛФ и рСМУЬас2/К-1.
6.18.5. Иммуноцитохимическое определение накопления дистрофина человека после внутримышечной трансфекции mdx-мышей.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Глава VII. Характеристика исходных препаратов.
7.1. Характеристика ЛФ.
7.2. Синтез производных ЛФ.
7.3. Характеристика производных ЛФ.
7.4. Исследование органного распределния конъюгата К-1.
Глава VIII. Характеристика взаимодействия ЛФ и его производных с плазмидными ДНК.
8.1. Электрофорез в агарозе комплексов плазмид с ЛФ и его производными.
8.2. Анализ нуклеотидных последовательностей плазмидных ДНК.
8.3. Определение констант диссоциации комплексов плазмид с немодифицированным ЛФ.
8.4. Определение влияния солей на комплексообразование ЛФ с плазмидными ДНК.
8.5. Определение гидродинамических размеров комплексов плазмид с ЛФ.
Глава IX. Доставка маркерных генов в культивируемые клетки млекопитающих.
9.1. Трансформация клеточных культур комплексами плазмида/ЛФ.
9.2. Трансформация клеток HepG2 плазмидой pCMVCat в комплексе с К-1 или К-2.
9.3. Трансформация клеток HepG2 плазмидой pCMVLacZ в комплексе с К-1.
9.4. Трансформация миобластов С2С12 плазмидой pCMVLuc в комплексе с К-1.
Глава X. Трансфекция лабораторных животных содержащими ЛФ комплексами.
10.1. Доставка маркерных генов при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К-1.
10.1.1. Доставка pCMVApo-Al при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К-1.
10.1.2. Доставка pEGFPC-3, pCMVLacZ при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К-1.
10.2. Доставка репортерных генов в составе комплексов с ЛФ после внутримышечного введения.
10.2.1. Доставка pCMVLacZ, комплексированной с ЛФ, при внутримышечном введении.
10.2.2. Доставка рСМУЬас2 и рЕОБРС-З в составе комплексов с ЛФ после внутримышечного введения.
10.2.3. Доставка рБМВ-1 в миофибриллы мутантных по дистрофину мышей.