Клонирование гена бета-галактозидазы Thermoanaerobacter ethanolicus и характеристика продукта этого гена Фокина, Наталия Алексеевна

Краткое описание

Фокина,НаталияАлексеевна.Клонированиегенабета-галактозидазыThermoanaerobacterethanolicusихарактеристикапродуктаэтогогена: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1996. - 95 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК На правах рукописиФОКИНАНАТАЛИЯАЛЕКСЕЕВНАКЛОНИРОВАНИЕГЕНАБЕТА-ГАЛАКТОЗИДАЗЫTHERMOANAEROBACTERETHANOLICUSИХАРАКТЕРИСТИКАПРОДУКТАЭТОГОГЕНАСпециальность 03.00.03 - молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата

стр. 2
источники. Промышленное использование р-галактозидазы. Организациягеновр-галактозидаз.Клонированиегеновр-галактозидазбактерий и структура соответствующих ферментов Структура р-галактозидазРегуляция р-галактозидазного синтеза Физико-химические свойства р-галактозидаз. Субстратная специфичность

стр. 6
р-галактозидазы; - иммобилизация фермента ихарактеристикабелка. нуклеотидной последовательности клонированногогенар-галактозидазы; и очистка р-галактозидазыТ.ethanolicusиз клеток банкагеновТ.ethanolicus- 7 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1. р-Галактозидазаи ее природные источники. р-Галактозидаза

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Фокина, Наталия Алексеевна
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. ß-Галактозидаза и ее природные источники.
1.2. Промышленное использование ß-галактозидазы.
1.3. Организация генов ß-галактозидаз.
1.4. Клонирование генов ß-галактозидаз бактерий и 12 структура соответствующих ферментов
1.5 Структура ß-галактозидаз
1.6 Регуляция ß-галактозидазного синтеза
1.7. Физико-химические свойства ß-галактозидаз. v 1.8 Субстратная специфичность ß-галактозидазы
1.9 Иммобилизация ß-галактозидаз
ЭСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды.
2.2. Химические реагенты и ферменты нуклеотидного обмена
2.3. Бактериальные среды и условия культивирования
2.4. Выделение и анализ плазмидной ДНК
2.5. Выделение хромосомной ДНК Т.ethanollcus
2.6. Конструирование геномной библиотеки.
2.7 Отбор активных клонов на чашках
2.8. Очистка ß-галактозидазы 42 2.8.1. Приготовление клеточных экстрактов
• 2.8.2. Фракционирование сульфатом аммония
2.8.3. Гель-фильтрация
2.8.4. Анион-обменная хроматография
2.9. Электрофорез и изоэлектрофокусирование
2.10. Методы определения активности ß-галактозидазы
2.10.1. Определение активности на хромогенных субстратах
2.10.2. Определение активности на лактозе
2.11. Определение концентрации белка
2.12. Определение термостабильности и pH-стабильности 46 белка
2.13. Иммобилизация галактозидазы
2.14. Определение активности иммобилизованной 47 ß-галактозидазы
2.15. Определение термостабильности и pH-стабильности 48 иммобилизованного белка
2.16. Определение нуклеотидной последовательности 48 гена ß-галактозидазы и компьютерный анализ полученных данных.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Создание банка генов и отбор активных клонов
3.2 Определение нуклеотидной последовательности 51 гена ß-галактозидазы Т.ethanolicus.
3.3 Выделение и очистка рекомбинантной ß-галактозидазы
3.4 Субстратная специфичность и физико-химические 66 характеристики ß-галактозидазы
3.5 Иммобилизация ß-галактозидазы Т.ethanolicus 74 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 79 ВЫВОДЫ 82 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Сокращения используемые в тексте диссертации
Да - дальтон
Ед. - единица активности фермента
ПААГ - полиакриламидный гель
ДТТ - дитиотрейтол т.п.н. - тысяч пар нуклеотидов
БОБ - додецилсульфат натрия
РС буфер - фосфат-цитратный буфер
Среда ЬВ - среда "Ьиг^а-ВегЧгап!"
Субстраты р№ - п-нитрофенил р№Са1 - п-нитрофенил-бета-Д-галактопиранозид оЫРСа1 - о-нитрофенил-бета-Д-галактопиранозид р№Ху1 - п-нитрофенил-бета-Д-ксилозид рЫРС - п-нитрофенил-бета-Д-глюкозид рМр-аСа1 - п-нитрофенил-альфа-Д-галактопиранозид
МШа1 - 4-метил-умбеллиферрил-бета-Д-галактозид