Молекулярно-генетические механизмы ранних стадий химически-индуцированного канцерогенеза у мышей Тимофеева, Ольга Алексеевна

Краткое описание

Тимофеева,ОльгаАлексеевна.Молекулярно-генетическиемеханизмыраннихстадийхимически-индуцированногоканцерогенезаумышей: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Новосибирск, 2000. - 132 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ НОВОСИБИРСКИЙ ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ на правах рукописиТИМОФЕЕВАОЛЬГААЛЕКСЕЕВНАМОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕМЕХАНИЗМЫРАННИХСТАДИЙХИМИЧЕСКИ-ИНДУЦИРОВАННОГОКАНЦЕРОГЕНЕЗАУМЫШЕЙ03.00.04. - Биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата

стр. 2
ОБЗОР Л И Т Е Р А Т У Р Ы 5 6 11МОЛЕКУЛЯРНЫЕАСПЕКТЫХИМИЧЕСКИ-ИНДУЦИРОВАННОГОГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗА 11 1.1.СТАДИЯИНИЦИАЦИИХИМИЧЕСКОГОКАНЦЕРОГЕНЕЗА13 1.1.1. Метаболическая активация проканцерогенов 1.1.1.1.Механизминдукции генов подсемейства Сур 1 а 1.1.1.2. Экспрессия генов цитохромов Р450 подсемейства

стр. 9
опухолей причинах развитияхимически-индуцированныхпослужили основанием для изучениямеханизмовканцерогенезав печенимышейи сравнительного анализа этихмеханизмовумышейразных инбредных линий с различной чувствительностью к действиюхимическихканцерогенов. Нам представляется, что, выявив изменения,

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Тимофеева, Ольга Алексеевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ АСПЕКТЫ ХИМИЧЕСКИ-ИНДУЦИРОВАННОГО
ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗА
1.1. Стадия инициации химического канцерогенеза
1.1.1. Метаболическая активация проканцерогенов
1.1.1.1. Механизм индукции генов подсемейства Сур 1 а
1.1.1.2. Экспрессия генов цитохромов Р450 подсемейства 1А
1.1.1.3. Чувствительность к индукции опухолей и уровень экспрессии генов цитохромов Р
1.1.1.4. Образование аддуктов ДНК и чувствительность к индукции опухолей
1.1.1.5. Изменение активности факторов транскрипции
1.1.2. Мутации как причина инициации канцерогенеза
1.1.2.1. Мутации в гене Н-газ
1.1.2.2. Роль гена Н-гаэ в формировании чувствительного к индукции опухолей генотипа.
1.1.3. Ген К-гаБ - один из детерминирующих чувствительность к действию канцерогена в легких
1.1.3.1. Различия в структуре гена у мышей, различающихся по чувствительности к индукции опухолей легких
1.1.3.2. Частота мутаций в разных аллелях гена К-гаэ '
1.1.4. Трансформация клеток связана с изменением экспрессии некоторых генов
1.1.4.1. Клетки-предшественники пренеопластических образований
1.1.4.2. Канцерогены вызывают изменение скорости пролиферации гепатоцитов
1.1.4.3. Химические канцерогены вызывают изменения в экспрессии некоторых генов
1.1.4.4. Изменения экспрессии гепацитарных ядерных факторов
1.2. Предпочтительный рост инициированных клеток приводит к развитию неопластических образований
1.2.1. Митогенное действие
1.2.2. Ингибирование апоптоза
1.2.3. Нарушение межклеточных коммуникаций
1.3. Различия в чувствительности к индукции опухолей проявляются на стадии промоции канцерогенеза
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
2.2. МЕТОДЫ 53 2.2.1. Определение нуклеотидной последовательности 53 аллельных вариантов гена К-гаэ
2.2.1.1. Получение препаратов геномной ДНК
2.2.1.2. Ампли фикация ДНК
2.2.1.3. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля
2.2.1.4. Прямое секвенирование ПЦР-фрагментов 56 с использованием Taq-пoлимepaзы
2.2.2. Определение частоты мутаций в 61 ко доне гена Н-гаэ 56 в опухолях печени
2.2.2.1. Аллель-специфичная полимеразная цепная реакция
2.2.3. Определение уровня экспрессии мРНК
2.2.3.1. Получение препаратов суммарной РНК из печени
2.2.3.2. Получение кДНК
2.2.3.3. Конкурентная ПЦР
2.2.3.3.1. Получение конкурентных стандартов ДНК
2.2.3.3.2. Определение количества кДНК 60 методом конкурентной ПЦР
2.2.3.4. Мультиплексная ПЦР
2.2.4. Дифференциальный дисплей мРНК
2.2.4.1. Амплификация кДНК со случайными праймерами
2.2.4.2. Клонирование ПЦР-фрагментов
2.2.4.2.1. Получение фрагментов ДНК с НтсШ!-адаптером
2.2.4.2.2. Приготовление вектора по липким концам
2.2.4.2.3. Лигирование фрагментов ДНК по липким концам
2.2.4.3.4.Трансформация компетентных клеток Е.соИ, 66 подготовленных с использованием МпСЬ
2.2.4.3.5. Скрининг бактериальных колоний с помощью ПЦР
2.2.4.3.6. Микровыделение плазмидной ДНК 66 2.2.4.4. Секвенирование клонов, содержащих
ПЦР-ные фрагменты ДНК
2.2.4.4.1. Выделение плазмиды для секвенирования с использованием силикогеля
2.2.4.4.2. Секвенирование плазмидной ДНК фрагментом Кленова
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Мутации в 61 кодоне гена Н-яаб в опухолях печени, индуцированных у мышей сильными и слабыми канцерогенами
3.2. Изучение корреляции между полиморфизмом нуклеотидной последовательности гена К-яа5 и чувствительностью мышей к химической индукции опухолей легкого
3.2.1. Анализ аллельных вариантов гена К-газ у исследуемых линий мышей
3.2.2. Уровень экспрессии гена К-гаэ у исследуемых линий мышей
3.3. Индуцибельность сур1а в печени мышей, различающихся по чувствительности к гепатоканцерогенному действию о-аминоазотолуола
3.4. Изменения в экспрессии генов в печени мышей с различной чувствительностью к действию о-аминоазотолуола на ранних сроках после введения канцерогена
3.4.1. Идентификация диффернциально экспрессирующихся генов 93 методом дифференциального дисплея мРНК
3.4.2. Уровень экспрессии генов и тОБТ у мышей линий
А/8п и СС57В
3.4.3. Уровень экспрессии генов эр! и швЗТ у мышей линий 98 ББ, 8¥11, С57ВЬ, ВАЬВ и АКЯ
3.4.3.1. Индукция микросомальной глутатион S-трасферазы
3.4.3.2. Индукция ингибитора сериновых протеаз 101 3.5. Влияние орто-аминоазотолуола на глюкокортикоидную индукцию тирозинаминотрансферазы
3.5.1. Отмена глюкокортикоидной индукции tat под действием О AT в печени мышей инбредных линий
3.5.2. Отмена глюкокортикоидной индукции tat в печени крыс и мышей под действием видоспецифичных канцерогенов