Синтез и метилирование ДНК в развивающихся этиолированных проростках пшеницы Кравченко, Светлана Александровна

Краткое описание

Кравченко,СветланаАлександровна.СинтезиметилированиеДНКвразвивающихсяэтиолированныхпроросткахпшеницы: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1983. - 113 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Ломоносова На правах рукописи УДК 547.963.32КРАВЧЕНКОСветланаАлександровнаСИНТЕЗИ ШТРШИРОВАНИЕДНКВ РАЗН^ВАЮЩИХСЯЭТИОЛИРОВАННЫХПРОРОСТКАХП Е И Ы

стр. 5
уровеньметилированияновообразованнойДНКвразвивающихсяпроросткахпшеницы3.1.1.Проросткипшеницыразного возраста 3.1.2. Разные органыпроростковпшеницы3.1.3. Колеоптили и листья разного возраста 3.2. Митохондриальная природа фракцииДНК, синтезиру­ ющейся в стареющих колеоптилях: ее состав и уро­

стр. 6
Первый листразвивающихсяэтиолированныхпроростковпшеницыкак модель для исследованияметилированияДНКв клеточном цикле на уровне целого растения: синхронностьсинтезаДНКв органе и возможность дифференцироватьсинтезмтДНК и яДНК 3.4.МетилированиеяДНК в клеточном цикле интеркалярной меристемы первого

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Кравченко, Светлана Александровна
Введение
I. Обзор литературы .II
I. Природа, возникновение дополнительных оснований и содержание 5-метилцитозина в ДНК растений.II
1.1. Природа дополнительных оснований в ДНК растений . II
1.2. Содержанке 5-метилцитозина в ДНК растений.
1.2.1. Видовые различия.
1.2.2. Тканевая (клеточная) разнокачественность метилирования генома растений.
1.2.3. Метилированные основания в ДНК субклеточных органелл растений (хлоропласты и митохондрии)
1.2.4. Метилирование ДНК при разных инфекциях и неблагоприятных условиях произрастания
1.2.5. Метилирование ДНК при прорастании семян
1.3. Возникновение дополнительных метилированных оснований в ДНК растений.
1.3.1. Механизм метилирования.
1.3.2. Специфичность метилирования ДНК.
1.4. Распределение 5-метилцитозина в геноме
1.4.1. Метилирование сателлитной ДНК.
1.4.2. Содержание 5-метилцитозина в AT- и GC -обогащенных фракциях ДНК.
1.4.3. Метилирование повторяющихся и уникальных последовательностей ДНК.
1.5. Метилирование и синтез ДНК
1.5.1. Возникновение полупрометилированных сайтов
1.5.2. Влияние 5-азацитидина.
I.6. Возможная функциональная роль метилирования ДНК у эукариотов.
II. Экспериментальная часть.
2. Материалы и методы исследования
2.1. Обработка и посев семян пшеницы, отбор и пикировка проростков.
2.2. Введение радиоактивной метки в ДЕК проростков
2.2.1. Срезанные проростки
2.2.2. Целые проростки
2.3. Фиксация проростков и подготовка к выделению ДНК
2.4. Выделение ДНК.
2.4.1. Использование модифицированного метода Шмидта и Таннгаузера для определения уровня метилирования и состава новообразованной ДНК.
2.4.2. Выделение ДНК с проназной и РНКазной обработкой для фракционирования в градиенте плотности хлористого цезия.
2.4.3. Выделение ДНК с проназной ж щелочной обработкой для анализа уровня метилирования.
2.5. фракционирование ДНК в градиенте плотности хлористого цезия.
2.6. Анализ состава и уровня метилирования ДНК.
2.6.1. Суммарная немеченая ДНК.
2.6.2. Меченая новообразованная ДНК.
2.7. Анализ состава (плавучей плотности) ДНК методом равновесного ультрацентрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия.
2.8. Выделение и очистка митохондрий из проростков пшеницы
2.9. Фиксация митохондрий, обработка, подготовка препаратов, электронная микроскопия.
2.10. Выделение ДНК из градиента плотности хлористого цезия и измерение радиоактивности
2.11. Измерение радиоактивности, включенной в ДНК отдельных органов проростка (динамика синтеза ДНК в проростке).
2.12. Определение содержания ДНК в проростке
3. Результаты и их обсуждение
3.1. Состав и уровень метилирования новообразованной
ДНК в развивающихся проростках пшеницы
3.1.1. Проростки пшеницы разного возраста
3.1.2. Разные органы проростков пшеницы
3.1.3. Колеоптили и листья разного возраста.
3.2. Митохондриальная природа фракции ДНК, синтезирующейся в стареющих колеоптилях: ее состав и уровень метилирования.
3.2.1. Метаболическая стабильность новообразованной в стареющем колептиле ДНК.
3.2.2. Влияние циклогксимида и бромистого этидия на синтез ДНК в стареющих колеоптилях.
3.2.3. Влияние истощения путем инкубации в воде срезан- , ных проростков на синтез ДНК
3.2.4. Митохондриальная природа новообразованной в стареющих колеоптидях ДНК, ее состав и уровень метилирования
3.3. Первый лист развивающихся этиолированных проростков пшеницы как модель для исследования метилирования ДНК в клеточном цикле на уровне целого растения: синхронность синтеза ДНК в органе и возможность дифференцировать синтез мтДНК и яДНК.
3.4. Метилирование яДНК в клеточном цикле интеркалярной меристемы первого листа развивающихся проростков пшеницы.
3.4.1. Уровень метилирования ДНК, синтезируемой в разные моменты цикла синтеза (короткая импульсная метка)
3.4.2. Динамика "дометилирования" новообразованной ДНК вне репликации.
3.4.3. Исследование репаративного синтеза ДНК в клеточном цикле в развивающихся проростках пшеницы.