Структура и функция гена РАХ-7 человека в норме и патологии Воробьев, Евгений Владимирович

Краткое описание

Воробьев,ЕвгенийВладимирович.СтруктураифункциягенаРАХ-7человекавнормеипатологии: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Санкт-Петербург, 1999. - 98 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Институт Экспериментальной Медицины РАМН Мюнстерский Государственный Университет На правах рукописиВоробьёвЕвгенийВладимировичСТРУКТУРАИФУНКЦИЯГЕНАРАХ-7ЧЕЛОВЕКАВНОРМЕИПАТОЛОГИИ03.00.04. биохимия диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: д.б.н.,

стр. 2
21 22 23 . . . . . . . . 24 24 26 27 29 32 34 34 35 . . . . . . 35 36 Экспрессия P A Xгеновв эмбриогенезе. P A Xгеныи раковые заболеваниячеловека.ГеныРАХЗ и РАХ7. 1.6.1. ЭкспрессиягеновРАХЗ и РАХ7 в эмбриональном развитии. 1.6.2.Патологии, связанные с потерейфункциигенаРАХЗ. 1.6.2.1. Мутация

стр. 7
небольшие делеции или инсерции. Цель настоящей работы состоит РАХ7 в изучении вструктурыи ифункцииДля транскрипционного факторачеловеканормепатологии. достижения поставленной цели предполагается решить следующие задачи: 1. Клонировать полную кодирующую последовательностьгенаРАХ7человека. 2. Определить геномную организациюгенаРАХ7человека. 3. Клонировать кДНК химерногогенаPAX7-FKHR, образуемого в результате...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Воробьев, Евгений Владимирович
СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Открытие PAX генов
1.2. Структурная организация белков PAX семейства
1.3. Структура ДНК - связывающих доменов PD и HD
1.3.1. Структура домена HD
1.3.2. Структура домена PD
1.4. Экспрессия PAX генов в эмбриогенезе
1.5. PAX гены и раковые заболевания человека
1.6. Гены РАХЗ и РАХ7
1.6.1. Экспрессия генов РАХЗ и РАХ7 в эмбриональном развитии
1.6.2. Патологии, связанные с потерей функции гена РАХЗ
1.6.2.1. Мутация Splotch мыши
1.6.2.2. Синдром Ваарденбурга
1.7. Альвеолярная рабдомиосаркома
1.7.1. Транслокация [t(2; 13)(q35; q 14)] в альвеолярной рабдомиосаркоме
1.7.2. Транслокация [t(1;13)(p36.2; q14)] в альвеолярной рабдомиосаркоме
2. Материалы и методы исследований
2.1. Клеточные линии
2.2. Клонирование кДНК гена РАХ7
2.3. Клонирование кДНК химерного гена PAX7-FKHR
2.4. Клонирование и анализ геномных клонов гена РАХ7
2.5. Конструирование экспрессионных векторов
2.6. Культивирование клеток и получение клеточных линий
2.7. Анализ ДНК-связывающей активности белков
2.8. Метод мягкого агара
2.9. Анализ клеточного цикла
2.10. Эксперименты с бестимусными мышами
2.11. Анализ экспрессии известных генов методом обратной гибридизации
2.12. Дифференциальный дисплей
2.13. Компьютерный анализ
3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1. Клонирование и анализ кДНК гена РАХ7
3.1.1. Скрининг фаговой библиотеки кДНК
3.1.2. Рабдомиосаркома как источник РНК для клонирования
кДНК гена РАХ7
3.1.3. Клонирование кДНК гена РАХ7 методом RACE
3.1.4. Старт трансляции белка РАХ7
3.1.5. Альтернативная терминация транскрипции гена РАХ7
3.1.6. Альтернативный сплайсинг транскриптов гена РАХ7
3.1.7. Белок РАХ7 отличается от РАХЗ уникальной последовательностью
в С - конце
3.2. Клонирование кДНК гибридного гена PAX7-FKHR
3.3. Геномная организация гена РАХ7 человека
3.3.1. Клонирование и анализ геномных клонов гена РАХ7
3.3.2. Гены РАХ7 и РАХЗ имеют сходную геномную организацию
3.3.3. Седьмой интрон гена РАХ7 вовлечен в транслокацию t(1; 13)
3.4. Клонирование геномных фрагментов генов РАХЗ и FKHR
3.5. РАХ7 - вероятный кандидат на роль гена опухолевого супрессора
3.6. РАХ7 и синдром Ваарденбурга
3.7. Перенос генов РАХ7 и PAX7-FKHR в клетки NIH3T3 и получение стабильных клеточных линий с конститутивной экспрессией соответствующих белков
3.7.1. Эктопическая экспрессия как подход для функционального анализа
генов РАХ7 и PAX7-FKHR
3.7.2. Эмбриональные фибробласты мыши в качестве тестовых клеток
3.7.3. Получение клеточных линий, экспрессирующих белки РАХ7
и PAX7-FKHR
3.8. Функциональный анализ генов РАХ7 и PAX7-FKHR
3.8.1. Общие характеристики полученных клеточных линий
3.8.2. Анализ клеточного цикла
3.8.3. Анализ клеток методом мягкого агара
3.8.4. Клетки, экспрессирующие PAX7-FKHR, образуют опухоли in vivo
3.8.5. Обобщение результатов функционального анализа генов РАХ7
и PAX7-FKHR
3.9. Анализ дифференциальной экспрессии генов
3.9.1. Анализ экспрессии известных генов методом обратной гибридизации
3.9.2. Идентификация и клонирование генов методом "дифференциального дисплея"
Выводы
Список литературы