Тепловая денатурация различных изоформ тропомиозина в отсутствие и в присутствии F-актина Кремнева, Елена Валериевна

Краткое описание

Кремнева,ЕленаВалериевна.ТепловаяденатурацияразличныхизоформтропомиозинавотсутствиеивприсутствииF-актина: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 2005. - 145 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Российская академия наук Институт биохимии им. А.Н.Баха На правах рукописиКремневаЕленаВалериевнаТепловаяденатурацияразличныхизоформтропомиозинавотсутствиеи вприсутствииF-актина03.00.04-биохимия диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор

стр. 7
сочетании с другими методами характератепловойденатурацииразныхизоформТМ вотсутствиеи вприсутствииактина, включая мышечные ТМ с мутациями в молекулах и немышечные ТМразличнойдлины, а также влияние на него других регуляторных белков. В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:

стр. 102
новый кооперативныйтепловойпереход (AT), возникающий только вприсутствииактина, отражаеттепловуюденатурациютех частей (калориметрических доменов) ТМ,денатурациякоторых вотсутствиеактинапроисходит при температурах нил<е Tdiss. Иными словами, эти части ТМ денатурируют вотсутствиеактинапри температурах

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Кремнева, Елена Валериевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Введение
Обзор литературы
1) Структура мышцы и основы мышечного сокращения.
2) Миозин.
3) Актин.
4). Молекулярный механизм подвижности.
5) Регуляция мышечного сокращения.
5.1. Миозиновый тип регуляции.
5.2. Актиновый тип регуляции.
6) Регуляторные белки тонкого филамента.
6.1. Тропомиозин.
6.1.1. Сходство и различие тропомиозинов из скелетных, сердечных и гладких мышц.
6.1.2 Немышечные тропомиозины.
6.1.3. Миопатии, связанные с мутациями в тропомиозине.
6.2. Тропонин.
6.2.1. Тропонин С
6.2.2. Тропонин I
6.2.3. Тропонин Т
7) Применение метода дифференциальной сканирующей калориметрии для структурных исследований мышечных белков.
7.1. Миозин.
7.2. Актин
7.3. Тропомиозин.
7.4. Тропонин.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Материалы и методы исследования.
1) Получение препаратов белков
1.1. Получение субфрагмента 1 миозина из скелетных мышц кролика.
Получение миозина. Разглицеринизация миозина. Получение субфрагмента 1 миозина (S1)
1.2. Выделение актина из скелетных мышц кролика.
Получение ацетонового порошка Выделение актина из ацетонового порошка
1.3. Приготовление препарата гладкомышечного тропомиозина
1.4. Приготовление препаратов скелетного тропомиозина и скелетного тропонина
1.5. Стабилизация F-актина фторидом алюминия
1.6. Экспрессия и очистка рекомбинантных ТМ.
1.7. Получение окисленных и восстановленных препаратов ТМ.
2) Используемые методы исследования
2.1. Определение АТРазной активности миозина
2.2. Градиентный электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии SDS
2.3. Исследования термодинамических характеристик белков методом дифференциальной сканирующей калориметрии.
Стандартный метод измерения.
Модифицированный метод измерения для некооперативных тепловых переходов.
2.4. Вискозиметрический метод.
2.5. Метод кругового дихроизма.
2.6. Соосаждение ТМ с F-актином.
2.7. Исследование диссоциации комплекса ТМ с актином методом светорассеяния.
Результаты и их обсуждение.
1) Взаимодействие скелетного тропомиозина с актином и тропонином.
1.1. Тепловая денатурация скелетного ТМ.
1.2. Взаимодействие ТМ с актином.
1.3. Регулируемый актиновый филамент.
2) Эффекты кардиомиопатических мутаций в тропомиозине.
2.1. Влияние FHC мутаций на тепловую денатурацию рекомбинантного ТМ.
2.2. Сродство ТМ к актину.
2.3. Тепловая денатурация мутантных форм ТМ в их комплексах с актином.
3) Предполагаемый механизм тепловой денатурации тропомиозина на поверхности актиновых филаментов.
4) Влияние структуры тропомиозина на характер его тепловой денатурации.
4.1. Влияние сегментов 2 и 3 на тепловую денатурацию дрожжевых ТМ.
4.2. Особенности тепловой денатурации немышечных ТМ.
4.2.1. Тепловая денатурация рекомбинантных ТМ: метод ДСК.
4.2.2. Исследование концевых взаимодействий: вискозиметрия.
4.2.3. Тепловая денатурация рекомбинантных ТМ: метод кругового дихроизма.
4.2.4. Исследование методом ДСК тепловой денатурации связанного с актином рекомбинантного ТМ.
4.2.5. Вызванная нагревом диссоциация комплекса ТМ-актин.
4.2.6. Суммарный анализ различий в тепловой денатурации гладкомышечного и фибробластных ТМ.
Выводы