Вивчення протеїногенних властивостей M. bovis та удосконалення способу виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців

Краткое описание

УКРАЇНСЬКА АКАДЕМІЯ АГРАРНИХ НАУК
НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР
«ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ
ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ»

На правах рукопису

Дегтярьов Ігор Миколайович

УДК 619:616:98:579.873.21:631.153.7

Вивчення протеїногенних властивостей M. bovis та удосконалення способу виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців

16.00.03 ветеринарна мікробіологія та вірусологія

Дисертація
на здобуття наукового ступеня
кандидата ветеринарних наук

Науковий керівник:
доктор ветеринарних наук,
професор,
член-кореспондент УААН Завгородній А.І.

Харків 2009

ЗМІСТ

Перелік умовних скорочень.........................................................................
Вступ.................................................................................................................
Розділ 1 Огляд літератури............................................................................
1.1. Відомості про мікобактерії.......................................................................
1.2. Збудники туберкульозу............................................................................
1.3. Атипові мікобактерії.................................................................................
1.2. Діагностика туберкульозу у тварин....................................................
1.2.1. Епізоотологічний метод.........................................................................
1.2.2. Клінічний метод.....................................................................................
1.2.3. Алергічний метод...................................................................................
1.2.4. Серологічний метод...............................................................................
1.2.5. Патологоанатомічний метод.................................................................
1.2.6. Бактеріологічний метод.........................................................................
1.3. Виготовлення туберкулінів...................................................................
1.3.1. Виготовлення туберкуліну із застосуванням білкових поживних середовищ.........................................................................................................
1.3.2.Виготовлення очищеного туберкуліну.................................................
1.3.3. Виготовлення леофілізованого туберкуліну........................................
1.3.4. Виробничі штами збудника туберкульозу...........................................
1.3.5. Методи стандартизації і контроль туберкуліну..................................
1.3.6. Виготовлення туберкуліну із застосуванням удосконалених технологій.........................................................................................................
Розділ 2 Матеріали та методи.....................................................................
Розділ 3 Результати власних досліджень..................................................
3.1. Стан епізоотичної ситуації з туберкульозу в господарствах Україні...

4
5
11
11
12
14
16
16
17
18
21
23
24
26

26
29
30
30
31

33
36
48

48

3.2. Селекція і адаптація культур мікобактерій M. bovis......
3.2.1. Вивчення біологічних властивостей туберкулінів, виготовлених зі штамів M.bovis............................................................
3.3. Виготовлення туберкуліну для ссавців за допомогою мікропористих мембран в умовах лабораторії.........................................................................
3.4. Виготовлення туберкуліну методом ультрафільтрації в умовах біофабрики........................................................................................................
3.4.1. Визначення біологічних властивостей туберкулінів, виготовлених за допомогою методу ультрафільтрації на лабораторних тваринах та сільськогосподарських тваринах....................................................................
3.5. Виготовлення туберкуліну (ППД) для ссавців з дезінтегрованої бактеріальної маси мікобактерій M. bovis..................................................
3.5.1. Вивчення біологічних властивостей туберкулінів, виготовлених з дезінтегрованої бакмаси M.bovis................................................................
3.6. Порівняльне випробування туберкулінів, виготовлених за різними технологіями, із закордонними алергенами..................................................
3.7. Удосконалення методу визначення біологічної активності національного зразка.......................................................................................
Розділ 4 Узагальнення результатів досліджень........................................
Висновки..........................................................................................................
Пропозиції виробництву...............................................................................
Список використаної літератури................................................................
Додатки.............................................................................................................

56

69

75

84

85

94

96

98

106
118
134
136
137
166

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ
ААМ алерген з атипових мікобактерій
АТК альттуберкулін Коха
ВТП внутрішньошкіряна туберкулінова проба
ВООЗ Всесвітня організація охорони здоров’я
ВРХ велика рогата худоба
ІЕКВМ УААН Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини Української академії аграрних наук
ІФА реакція імуноферментного аналізу
КАМ комплексний алерген із атипових мікобактерій
МЕБ міжнародне епізоотичне бюро
МПБ м'ясо-пептонний бульйон
МПА м'ясо-пептонний агар
МО міжнародна одиниця
ННЦ «ІЕКВМ» Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини»
Об/ хв. обертів за хвилину
ППД protein purified derivate
ПЛР полімеразна ланцюгова реакція
РЗК реакція зв’язування комплементу
РЗММ реакція затримки міграції макрофагів
СА сульфат амонію
СЖС синтетичне живильне середовище
СОТ сухий очищений туберкулін
ТУ У технічні умови України
ТО туберкулінова одиниця
ТХО трихлороцтова кислота
BCG bacillus Calmette-Guerin
ЄФ Європейська фармакопея

ВСТУП
Актуальність теми. Основним завданням галузі тваринництва є забезпечення населення продуктами харчування, зокрема м’ясом і молоком. Успішний розвиток тваринництва неможливий без здійснення комплексних протиепізоотичних заходів, які забезпечують підтримування благополуччя поголів’я тварин, а в разі виникнення захворювань— здійснення оздоровчих заходів.
Значних економічних збитків галузі тваринництва завдають інфекційні хвороби, які є загрозою для інших видів тварин та людей. Одним з особливо небезпечних зооантропозоонозних захворювань є туберкульоз, яким найбільше уражена велика рогата худоба (ВРХ) [1, 2, 3].
Останніми роками кількість неблагополучних щодо туберкульозу господарств великої рогатої худоби в Україні зменшилась із 149 у 1996році до 60 у 2006році. Разом з цим, під час планових алергічних досліджень у 230благополучних щодо захворювання на туберкульоз господарствах України виявляють тварин, що реагують на туберкулін, у яких під час розтину у внутрішніх органах не виявляють властивих туберкульозу уражень, і такі господарства зазнають значних економічних збитків через необґрунтований забій здорових тварин [4, 5, 6, 7, 8, 9].
У системі заходів боротьби та профілактики захворювання на туберкульоз тварин важливе значення має своєчасне виявлення джерела інфекції. Для прижиттєвої діагностики цього захворювання в Україні та за кордоном застосовують алергічний метод— із застосуванням туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців [4, 8, 10].
Застосування туберкуліну дозволяє виявляти інфікованих та хворих на туберкульоз тварин на різних стадіях інфекційного та епізоотичного процесів. Проте слід зазначити, що реакції на туберкулін у тварин можуть бути зумовлені не тільки збудниками туберкульозу, але й атиповими мікобактеріями за деяких гельмінтозних захворювань та білкового перекорму [1, 8, 10]
Для виготовлення туберкуліну (ППД) в стандартному розчині застосовують осадження туберкулопротеїну із культурального фільтрату хімічні сполуки.
За літературними даними та власними дослідженнями при цьому глибокої очистки туберкуліну (ППД) не відбувається [11, 12]
Використання на різних етапах осадження протеїну забезпечує стандартизацію туберкуліну, але підвищує собівартість препарату і також зумовлює денатурацію молекул білка, що призводить до зменшення виходу кінцевого продукту.
За даними авторів, використання методів фракціонування біологічних макромолекул дозволяє виділити з туберкуліну баластні крупномолекулярні полісахариди та ліпопротеїдні фракції, що забезпечує отримання неімуногенних туберкулінів, стандартизованих за молекулярною вагою, які містять у своєму складі найбільш специфічні фракції протеїнів [12, 13, 14].
Тому пошук шляхів удосконалення схеми біофабричного виготовлення і підвищення якості туберкуліну є актуальною проблемою і на сьогодні.
У зв’язку з цим, для підтримки благополуччя та контролю епізоотичної ситуації щодо туберкульозу в Україні необхідно здійснювати планові діагностичні дослідження ВРХ в господарствах різних форм власності, що обумовлює необхідність виготовлення вітчизняного високоспецифічного нереактогенного та біологічно активного туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців.
Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана згідно з планами науково-дослідних робіт Національного наукового центру «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини» на 20012005рр. за завданням «Розробити систему заходів боротьби з туберкульозом сільськогосподарських тварин в умовах реформування тваринництва» (номер державної реєстрації 0101U001615) та за завданням на 20062010рр. «Вивчити поширення, адаптивну мінливість мікобактерій, особливості інфекційного та епізоотичного процесів у тварин, уражених різними видами мікобактерій, і вдосконалити заходи профілактики та боротьби з туберкульозом тварин» (номер державної реєстрації 0106U000351).
Мета і завдання дослідження. Мета досліджень— вивчити епізоотичну ситуацію щодо туберкульозу ВРХ в господарствах України й удосконалити спосіб виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців. Для досягнення мети були поставленні такі завдання:
проаналізувати епізоотичну ситуацію щодо туберкульозу ВРХ в господарствах України;
виділити культури мікобактерій з патологічного матеріалу ВРХ та вивчити їх протеїногенні властивості;
виготовити з культурального фільтрату та бактеріальної маси протеїногенних культур M.bovis туберкулін очищений (ППД) для ссавців та вивчити його властивості;
оптимізувати технологічну схему виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців, зокрема ВРХ;
удосконалити методику визначення повноти інактивації M.bovis та біологічної активності туберкуліну для ссавців відповідно до міжнародних вимог.
Об’єкт дослідження: туберкульоз, туберкулін.
Предмет дослідження: епізоотологічна ситуація щодо туберкульозу ВРХ в Україні, діагностика, протеїногенні властивості мікобактерій M.bovis, поживні середовища.
Методи дослідження: епізоотологічний, алергічний, біохімічний, клінічний, патологоанатомічний, бактеріологічний та статистичний.
Наукова новизна одержаних результатів. Із біоматеріалу виділено та селекційовано протеїногенний штам M.bovis, удосконалено спосіб висіву й адаптації його та вирощування на синтетичному поживному середовищі;
установлено, що туберкулін, виготовлений методом ультрафільтрації з використанням мембранного фракціювання молекул туберкулопротеїну з молекулярною вагою від 10 до 300кДа, за біологічними властивостями не поступається туберкуліну (ППД) для ссавців у стандартному розчині;
удосконалено технологічну схему біофабричного виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців;
уперше отримано та вивчено біологічні властивості туберкуліну з дезінтегрованої бактеріальної маси протеїногенної культури M.bovisІЕКВМ‑1 і доведено, що цей туберкулін не має сенсибілізуючих властивостей, є специфічним, з високою біологічною активністю. Доведено, що зі 100г дезінтегрованої бактеріальної маси можна додатково вилучати 78,5см3 високоспецифічного туберкуліну;
розроблено методику визначення повноти інактивації та біологічної активності туберкуліну (ППД) для ссавців згідно з міжнародними вимогами.
Новизна розробок підтверджена патентом України №25807 на корисну модель «Туберкуліногенний штам M.bovis №4» та свідоцтвом Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів №425.
Практичне значення одержаних результатів. Удосконалено технологічну схему біофабричного виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців з використанням порожнистих мембран, що дозволяє в біофабричних умовах отримати специфічний та високоактивний алерген.
Отриманий шляхом селекції протеїногенний штам збудника туберкульозу M.bovis придатний для виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців, який депоновано до ДНКІБШМ та отримано свідоцтво №425 від 13.06.2007р.
Розроблено методику визначення повноти інактивації туберкуліну для ссавців, яка увійшла до ТУУ 24.4-00497087-645-2001 (зміна №1 від 23.12.2004р.).
Дані щодо використання порожнистих волокон під час виготовлення туберкуліну увійшли до інструкції з виготовлення туберкуліну.
Розроблено методику визначення біологічної активності туберкуліну (ППД) для ссавців, яка включена до ДСТУ «Препарати ветеринарні. Стандартний зразок туберкуліну для ссавців. Метод контролювання біологічної активності», що застосовується як національний стандарт туберкуліну відповідно і до вимог ЄФ та МЕБ.
Особистий внесок здобувача. Автор дисертаційної роботи самостійно виконав основний обсяг експериментальних досліджень, їх статистичну обробку та узагальнення отриманих результатів. Визначення кількості загального білка в туберкуліні проводилось спільно з провідним науковим співробітником лабораторії біохімії ННЦ «ІЕКВМ», кандидатом біологічних наук С.А.Михайловою.
Виготовлення експериментальних серій за вдосконаленою технологією здійснювали в умовах лабораторії вивчення туберкульозу ННЦ «ІЕКВМ» та вивчення його біологічних властивостей здійснювали спільно з провідним науковим співробітником лабораторії вивчення туберкульозу, кандидатом ветеринарних наук В.В.Білушко.
Апробація результатів дисертації. Матеріали дисертації доповідались, обговорювались і були схвалені на звітних сесіях вченої ради ННЦ «ІЕКВМ» (Харків, 20052007рр.); міжнародній науковій конференції «Актуальні питання боротьби з інфекційними захворюваннями в гуманній і ветеринарній медицині» (Харків, 2005р.); науково-практичній конференції, присвяченій 75‑річчю Новогалещинської біофабрики «Проблеми епізоотології, імунології та біотехнології у ветеринарній медицині» (Полтава, 2006р.); міжнародній науково-практичній конференції «Молоді вчені у вирішенні проблем аграрної науки і практики» (Львів, 2006р.); науково-практичній конференції, присвяченій 85‑річчю Луганського національного аграрного університету (Луганськ, 2006р.).
Публікації. Результати дисертаційної роботи викладено в 9друкованих працях у фахових виданнях, перелік яких затверджено ВАК України, з них в 1статті, опублікованій одноосібно здобувачем, а також у патенті України на штам M.bovis.
Структура дисертації. Дисертація викладена на 136сторінках комп’ютерного друку та складається з переліку умовних позначень, вступу, огляду літератури, матеріалів та методів досліджень, опису власних досліджень, узагальнення результатів досліджень, висновків, списку використаної літератури, додатків, повний обсяг дисертації складає 173 сторінки. Роботу проілюстровано 27таблицями, 13рисунками. Список використаної літератури містить 271джерело, серед яких 56праць закордонних авторів.

Список литературы

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

1. Туберкулёз животных и меры борьбы с ним [Текст] / Ю.Я. Кассич [идр.]. К.: Урожай, 1990. 304 с.
2. Шиков В.Г. Туберкулёз сельскохозяйственных животных и его профилактика [Текст] / В.Г. Шиков, В.П. Урбан. М.: Агропромиздат, 1991. 255 с.
3. Кузин А.И. Туберкулёз сельскохозяйственных животных и его профилактика [Текст] / А.И. Кузин. М.: Росагропромиздат, 1992. С. 7890.
4. Овдиенко Н.П. Основные направления и достижения науки в борьбе с туберкулёзом и паратуберкулёзом животных [Текст] / Н.П. Овдиенко, А.Х.Найманов // Труды ВИЭВ. М., 1998. Т. 71. С. 195215.
5. Павлас М. Значение внутрикожной туберкулинизации для ликвидации туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / М. Павлас // Ветеринария. 1991. № 5. С. 1720.
6. Оценка показаний аллергической реакции у крупного рогатого скота при туберкулёзе [Текст] / В.П. Урбан [и др.]. Ветеринария. 1991. № 9. С. 2729.
7. Юдин Г.А. Совершенствование диагностики туберкулёза животных [Текст] / Г.А. Юдин // Ветеринария. 1990. № 6. С. 2729.
8. Найманов А.Х. Проблема диагностики и профилактики туберкулёза крупного рогатого скота в современных условиях [Текст] / А.Х. Найманов // Ветеринарная патология. 2004. № 12. С. 823.
9. Прокопьева Н.И. Изучение природы аллергических реакций у крупного рогатого скота благополучных по туберкулёзу стад [Текст] / Н.И.Прокопьева // Ветеринарная патология. 2004. № 12. С. 134136.
10. Вітчизняний туберкулін є! [Текст] / Ю.Я. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 2001. № 1. С. 1617.
11. Безгин В.М. Промышленная технология производства препаратов для диагностики туберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота [Текст] : автореф. дис д-ра биологических наук / В.М. Безгин. М., 1999. 51с.
12. Безгин В.М. Новые технологии производства диагностических препаратов для ветеринарной медицины [Текст] / В.М. Безгин, В.Е. Козлов // Ветеринарна медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2002. Вип. 81. С.4145.
13. Получение высокоактивного и специфичного аллергена для массовой диагностики туберкулёза у крупного рогатого скота с помощью ультрафильтрации [Текст] / А. П. Лысенко [и др.] // Вет. медицина Беларуси. 2001 № 4. С. 1214.
14. Галкин Н.И. Физико-химические и биологические свойства туберкулопротеинов, очищенных гельфильтрацией [Текст] / Н.И. Галкин: автореф. дис. канд. биолог. наук / Всесоюз. науч.-исслед. ин-т биолог. пром. М., 1978. 15 с.
15. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям [Текст] / под ред. Л.Г. Смирновой, Е.А. Кост. М.: Медгиз, 1960. С.197200.
16. Туберкулін очищений (ППД) для ссавців у стандартному розчині [Текст], ТУ У 24.4-00497087-2001. К., 2002. 52 с.
17. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях [Текст] / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьёв. М.; Медгиз. 1962. 180 с.
18. Лакин Г.Ф. Биометрия [Текст] / Г.Ф. Лакин. М.: Вища школа, 1990. С. 131133.
19. Кох Р. Эпизоотология бугорчатки [Текст] / Р. Кох. // Ветеринарный вестник. 1882. 136 с.
20. Определитель бактерий Берджи [Текст] : в 2 т. / под ред. Дж.Хоулта [и др.] 9-е изд. М.: Мир, 1997. Т. 1. 426 с.
21. Тузова Р.В. Туберкулёз сельскохозяйственных животных и птицы [Текст] / Р.В. Тузова. Минск, 1983. 263 с.
22. Туберкулёз cельскохозяйственных животных [Текст] / А.М.Количёв [и др.]. М: Агропромиздат, 1991. 17 с.
23. Завгородний А.И. Виды микобактерий и их эпизоотологическое значение для крупного рогатого скота [Текст] / А.И. Завгородний // Ветеринарна медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2000. Вип. 78, т. 1. С.108113.
24. Feldman M.H. An investigation to determine the sensitizing agent in cattle tested with mammalian and wish avium tuberculin Am [Text] / M.H.Feldman, H.E. Moses // J. Vet. Res. 1942. Vol. 3. P. 39.
25. Growel R. Die Gerflugeltubercubse als storungsquelle bei der Rindertuberculose dekamplung [Text] / R. Growel // Deutsch. Tierarztl. Wsehr. 1965. № 18. S. 6568.
26. Михайлова С.А. Вивчення молекулярних характеристики антигенів, виділених із атипових мікобактерій [Текст] / С.А. Михайлова // Розвиток ветеринарної науки в Україні : матеріали міжнар. наук.-практ. конф. Х., 1997. 204 с.
27. Kettler P.J. Pathology and tuberculin sensitivity in cattle inoculated with Mycobacterium avium complex serotypes 6, 14 and 18 [Text] / P.J. Kettler, R.J.Rogers, B.I. Donald // Austral. Vet. J. 1981. Vol. 57. №2. P. 6165.
28. Агеева Т.П. Антитела, иммунные комплексы, антигены при туберкулёзе крупного рогатого скота, инфицированного атипичными микобактериями [Текст] / Т.П. Агеева : автореф. дис канд. вет. наук / БелНИЭВ. Минск, 2000. 22 с.
29. Красников Г. Патогенність атипових мікобактерій та мібактеріози [Текст] / Г. Красников // Вет. медицина України. 1997. № 7. С. 2829.
30. Нуратинов Р.А. Изучение сенсибилизирующих к туберкулину свойств нокардий и родококов [Текст] / Р.А. Нуратинов, М.О.Баратов, И.В.Эфиндиева // Ветеринария. 2001. № 11. С.2327.
31. Завгородний А.И. Причины реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в благополучных по туберкулёзу хозяйствах [Текст] / А.И.Завгородний // Розвиток ветеринарної науки в Україні : зб. матеріалів міжнар. наук.-практ. конф. Х., 1997. С. 9496.
32. Ротов В.И. Туберкулёз сельскохозяйственных животных [Текст] / В.И. Ротов, П.И. Кокуричев, П.Е. Савченко. К.: Урожай, 1978. 237 с.
33. Микитин О. Епізоотичне значення туберкульозу курей, заражених M.tuberculosis, M.bovis, M.avium, в епідеміології [Текст] / О. Микитин // Вет. медицина України. 2001. № 4. С. 1213.
34. Никаноров Б.А. Роль возбудителя туберкулёза птичьего вида в эпизоотологии туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / Б.А. Никаноров : автореф. дис. канд. вет. наук / ВИЭВ. М., 1963. 17с.
35. Найманов А.Х. Проблемы діагностики и профилактики туберкулёза крупного рогатого скота в современных условиях [Текст] / А.Х. Найманов, // Ветеринарная патология. 2004. № 12. С. 18 23.
36. Антигенна спорідненість видів мікобактерій та її значення для діагностики туберкульозу тварин [Текст] / Ю.Я. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 1997. № 5. С. 1617.
37. Визначення природи реакції на туберкулін у великої рогатої худоби шляхом застосування симультанної алергічної проби [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 2001. № 5. С. 1415.
38. Лысенко А.П. Антигены Micobacterium bovis и атипичных микобактерий, изучение и применение для дифференциальной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / А.П. Лисенко : автореф. дис. д-ра вет. наук. Минск, 1994. 33 с.
39. Bonike R. Identification of micobacteria by biochemical metods [Text] / R. Bonike // Bull. Int. Union. Tub. 1962. Vol. 32, № 1. P. 1368.
40. Корх В.А. Причины неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота [Текст] / В.А. Корх // Ветеринария. 1990. № 6. С. 1920.
41. Gerl H. Presence of atypical micobacteria in automatic drinkers for livestock [Text] / H. Gerl // Freic. Univ. Berlin. 1972. P. 5760.
42. Деякі епізоотичні паралелі та особливості прояву туберкульозу у мікобактеріозної інфекції великої рогатої худоби [Текст] / О. Ткаченко [таін.] // Вет. медицина України. 1999. № 10. С. 1719.
43. Кассич Ю.Я. Эффективность комплексного метода диагностики туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / Ю.Я. Кассич, В.А.Кочмарский, А.И. Завгородний // Проблемы научного обеспечения животноводства Молдавии: тез. докл. конф. (Кишинёв, 25 мая 1990 г.). Кишинев, 1990. С. 111112.
44. Благодарный Я.А. Туберкулёз как зооантропоноз [Текст] / Я.А.Благодарный. Алма-Ата, 1972. 200 с.
45. Матвеев В.Н. Опыты вакцинации крупного рогатого скота по Кальмету [Текст] / В.Н. Матвеев // Проблемы туберкулёза. 1938. № 1. С.24.
46. Зыков М.П. Микробиология туберкулёза [Текст] / М.П. Зыков. М.: Медгиз, 1963. 254 с.
47. Медицинская микробиология [Текст] / под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. С. 499516.
48. Юсковец М.К. Туберкулёз домашних животных и способы борьбы с ним [Текст] / М.К. Юсковец. М.: Огиз-Сельхозгиз, 1948. С. 16.
49. Широкобокова М.М. Характеристика культур микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота и из объектов внешней среды [Текст] / М.М. Широкобокова, Т.Б. Илина // Сб. науч. тр. Ленингр. вет. ин-та. Л., 1878. Вып. 52. С. 2537.
50. Ротов В.И. Туберкулез птиц [Текст] / В.И. Ротов. К.: Урожай, 1976. 152 с.
51. Weber A. Zum Nachweis con sog. Atypischen Mycobakterien in Kopf und Darmlymphknoten nicht tuberkuloser Schlachtschweine [Text] / A. Weber, T.Schliesser // Zbl. F. Vet. Med. 1974. B.21, №.10. S. 799806.
52. Feldman M.H. An investigation to determine the sensitizing agent in cattle tested with mammalian and with avium tuberculins [Text] / M.H. Feldman, H.E. Moses // Am. J. Vet. Res. 1942. Vol. 3. P. 39.
53. Кассіч Ю.Я. Вивчення культур мікобактерій виділених від великої рогатої худоби та об’єктів зовнішнього середовища [Текст] / Ю.Я. Кассіч, А.І. Завгородній, В.А. Кочмарський // Ветеринарія : респ. міжвід.темат. наук. зб. К., 1992. Вип. 67. С. 5861.
54. Юдин Г.А. Дифференциация атипичных нефотохромогенных микобактерий и M.avium [Текст] / Г.А. Юдин, О.В. Якушева // Проблемы туберкулеза. 1978. № 10. С. 5961.
55. Тузова Р.В. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птиц [Текст] / Р.В. Тузова. Минск, 1983. 263 с.
56. Якушева О.В. Патогенность M.avium и M.intracellulare для лабораторных животных [Текст] / О.В. Якушева, А.М. Кадочкин // Актуальные проблемы профилактики и борьбы с туберкулезом и бруцеллезом животных : бюл. ВИЭВ. М., 1987. Вып. 64. С. 4951.
57. Козлов Н.Н. Изменения у свиней при поражении атипичными микобактериями [Текст] / Н.Н. Козлов, К.И. Пыльдверс // Ветеринария. 1982. № 6. С. 3438.
58. Трубкин А.И. Свойства микобактерий, выделенных от животных реагировавших на туберкулин [Текст] / А.И. Трубкин, М.В. Харитонов // Ветеринария. 2005 № 11. С. 23-25.
59. Кассич Ю.Я. Изучение сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий [Текст] / Ю.Я. Кассич, В.А. Кочмарский, П.М. Тихонов // Ветеринария. 1985. № 2. С. 2930.
60. Овдиенко Н.П. Парааллергические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, инфицированного микобактериями паратуберкулёза [Текст] / Н.П. Овдиенко // Труды ВИЭВ. М., 1985. Т. 62. С.6429.
61. Завгородній А.І. Вивчення антигенної спорідненості мікобактерій виділених в тваринницьких господарствах України [Текст] / А.І.Завгородній // Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. Х., 1996. Вип. 72. С. 41 45.
62. Румачик И.И. Динамика выделения микобактерий от скота и птицы в Республике Беларусь за 19761993 г. [Текст] / И.И. Румачик, Н.И. Король // Известия Акад. аграр. наук Беларуси. Минск, 1995. № 2. С.7778.
63. Runyon E. Whence Mycobacteria and Mycobacterioses [Text] / E.Runyon // Ann. Int. Med. 1971. Vol. 75, № 3. P. 467468.
64. Павлас М. Эпизоотология атипичных микобактериозов в промышленном свиноводстве [Текст] / М. Павлас, Г. Гейличек // XXI Всемир. вет. конгресс. 1976. №6. С. 72.
65. Iнфекцiйний та епiзотичний процеси у тварин, уражених патогенними та сенсибiлiзованими до туберкулiну непатогенних мiкобактерiй [Текст] / Ю.Я.Кассiч [та ін.] // Вiсник аграрної науки. 1995. № 3. С.7278.
66. Ткачев-Кузьмин А.В. Роль некоторых видов атипичных микобактерий в сенсибилизации крупного рогатого скота к туберкулину [Текст] / А.В. Ткачев-Кузьмин // Бюл. ВИЭВ. М., 1981. Вып. 43. С.2739.
67. Завгородний А.И. Виды микобактерий, распространение в хозяйствах Украины, и их эпизоотическое значение [Текст]: дис. ...д-ра вет. наук / А.И. Завгородний. Х., 1997. 298 с.
68. Тихонов П.М. Вивчення показників клітинного та гуморального імунітету у великої рогатої худоби ураженої збудником туберкульозу та сенсибілізованими атиповими мікобактеріями [Текст] / П.М. Тихонов // Розвиток ветеринарної науки в Україні: зб. матер. міжнар. наук.-практ. конф. Х., 1997. С. 100120.
69. Прокопьева Н.И. Изучение природы аллергических реакций у крупного рогатого скота благополучных по туберкулёзу стад [Текст] / Н.И.Прокопьева // Ветеринарная патология. 2004. №12. С. 134136.
70. Баенский А.В. Определение антигенов микобактерий, находящихся в иммунных комплексах [Текст] / А.В. Баенский, Н.В. Демьяненко // Проблемы туберкулеза. 1993. № 6. С. 56.
71. Определитель бактерий Берджи [Текст] : в 2-х т. / под ред. Дж. Хоулта [и др.]. 9-е изд. М.: Мир, 1997. Т. 2. 368 с.
72. Runyon E.H. Differenciation des mycobacteries anonymes et des bacilles tuberculeus des mammifers [Text] / E.H. Runyon // Bul. un. lut. coutre Tuberc. 1965. Vol. 29, № 12. P. 7282.
73. Зубехин А.В. Критерии оценки благополучия по туберкулёзу при появлении у крупного рогатого скота гетероалергических и неспецифических реакций на туберкулин [Текст] / Зубехин А.В. // Сб. науч. тр. Вост. отд. ВАСХИЛ. АлмаАта, 1981.
74. Ходун Л.М. Выделение атипичных микобактерий от не реагировавших на туберкулин животных [Текст] / Л.М. Ходун, Л.В.Погуляева, Л.Л. Ильных // Ветеринария. 1990. № 6. С. 2930.
75. Юдин Г.А. Причины распространения дифференциация и профилактика неспецифических реакций на туберкулин [Текст] / Г.А. Юдин // Ветеринария. 1987. № 12. C. 2933.
76. 18. Юдин Г.А. Всесоюзный ГНКИ ветпрепаратов [Текст] / Г.А. Юдин // Ветеринария. 1990. № 6. С. 27-29.
77. Коли ж виникають реакції на туберкулін у великої рогатої худоби щепленої мікобактеріями [Текст] / Ю.Я. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 1999. № 8. С. 26.
78. Застосування симультанної алергічної проби для визначення природи реакцій на туберкулін ухудоби, благополучного щодо захворювання на туберкульоз [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 2003. № 1. С. 1718.
79. Епізоотичний моніторинг [Текст] / В.Бусол [та ін.] // Вет. медицина України. 1999. № 2. С. 64 67.
80. Реабілітаційні заходи у господарствах щодо туберкульозу великої рогатої худоби [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина Укр. 2002. №1. С. 1314.
81. Епізоотичне спостереження засіб прогнозування епізоотичної ситуації, керування нею та вдосконалення заходів боротьби з туберкульозом. [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 2003. № 3. С. 1517.
82. Найманов А.Х. Современные задачи в борьбе с туберкулёзом крупного рогатого скота [Текст] / А.Х. Найманов, Н.П. Овдиенко // Ветинформ. 2002. № 4. С. 1618.
83. Колычев Н.М. Экологические особенности микобактерий туберкулёза [Текст] / Н.М. Колычев // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллёзом и туберкулёзом животных. Новосибирск, 1987. С.113121.
84. Овдиенко Н.П. Эпизоотология и диагностика туберкулёза крупного рогатого скота в условиях интенсификации животноводства [Текст] / Н.П.Овдиенко : автореф. дис д-ра вет. наук. М., 1990. 36 с.
85. Бакулов И.А. Новый этап развития эпизоотологии [Текст] / И.А.Бакулов // Ветеринария. 1992. № 3. С. 35.
86. Епізоотичне значення видів мікобактерій, виділених в господарствах України [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 1996. № 9. С. 24 25.
87. Bojalil L.T. Taxonomia analisis if nonpigmented rapidly growing mycobacteria [Text] / L.T. Bojalil, J. Cerdon // J. Bact. 1961. Vol. 81. P. 2427.
88. Chandraskhar S. Bacteriological and Cultural Studies on Atypical Mycobacteria Isolated from patients with Chronic Nontuberculous Respiratory Distases [Text] / S. Chandraskhar // Indian. J. Chtst. Dis. 1973. Vol. 15, № 3. P. 189194.
89. Huiteman H. Atypishe mycobacterien hun rolals ziekteverwekker an als storende factor dig de bestrijding van tuberculose [Text] / H. Huiteman // Tijdschr. diergenesk. 1972. Vol. 97, № 13. P. 757767.
90. Башенин В.А. Общая эпидемиология [Текст] / В.А. Башенин. М.: Медгиз, 1958. 249 с.
91. Hubrig T. Uber die Luverlassigkei der intracutanen Tuberkuliprobe [Text] / T. Hubrig // Monatshefte fur veterinarmedizin. 1957. № 24. S. 689.
92. Marshal C. Progress in controlling bovine tuberculosis [Text] / C.Marshal // J. Am. Vet. Med. Asoss. 1932. 1932. Vol. 80. P. 625630.
93. Лазовская А.Л. Иммунохимическая активность препаратов туберкулопротеина в процессе их изготовления [Текст] / А.Л. Лазовская // Проблемы туберкулёза. 1971. № 1. С. 7983.
94. Моноштамные туберкулины для диагностики туберкулёза у крупного рогатого скота [Текст] / Н.П. Овдиенко [и др.] // Бюл. ВИЭВ. М: ВИЭВ, 1981. Вып. 43. С. 68.
95. Ходун Л.М. Оптимизация аллергической и лабораторной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / Л.М. Ходун : автореф. дис д-ра вет. наук. Казань, 1997. 31 с.
96. Урбан В.П. Оценка показаний аллергической диагностической пробы при туберкулёзе у крупного рогатого скота [Текст] / В.П. Урбан, М.М.Широкобокова, Ю.Ю. Данко // Современные проблемы профилактики и терапии заразных болезней сельскохозяйственных животных : сб. науч. тр. Л., 1984. № 80. С. 9398.
97. Досягнення науки і практики в застосуванні методу алергічної діагностики туберкульозу великої рогатої худоби [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 1999. № 9. С. 1820.
98. Изучение активности и специфичности антигенов M.bovis и M.avium в иммуноферментном анализе [Текст] / В.Е. Козлов [и др.] // Ветеринарна медицина : міжвід. темат. наук. зб. 2003. Вип. 82. С. 285288.
99. Порівняльне вивчення туберкулінів [Текст] / Ю. Кассіч [та ін.] // Вет. медицина України. 2001. № 8. С.3233.
100. Достижения науки и практики в изучении туберкулёза животных [Текст] / Ю.Я. Кассич [и др.] // Ветеринария. 1998. № 12. С. 3538.
101. Тургунбаев А. КСКЖ-туберкулин при диагностике туберкулёза животных [Текст] / А. Тургунбаев, С.О. Кадыров // Современные проблемы эпизоотологии. М., 2004. С. 253264.
102. Особливості внутрішньовенної туберкулінової проби при туберкульозі та мікобактеріозній інфекції великої рогатої худоби [Текст] / М.Зеленська [та ін.] // Вет. медицина Укрaїни. 2001. № 12. С. 1113.
103. Ткаченко О.А. Внутришньошкірна туберкулінова проба. Актуальні питання та деякі напрямки їх вирішення [Текст] / О.А. Ткаченко // Вет. медицина України. 2002. № 1. С. 1112.
104. Кочмарский В.А. Сравнительное изучение эффективности внутрикожной туберкулиновой пробы [Текст] / В.А. Кочмарский // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2004. Вип. 84. С. 380383.
105. Козин А.И. Уточнение диагноза на туберкулё в условно благополучных хозяйствах [Текст] / А.И. Козин // Бюл. Всесоюз. ин-та экспериментальной ветеринарии. М., 1981. Вып. 43. С. 911. Руманчик И.И. Особенности аллергических исследований на туберкулёз [Текст] / И.И. Руманчик, А.А. Солоненко // Ветеринария. 1984. № 9. С. 3031.
106. Сысоев В.А. Диагностическая ценность внутрикожной туберкулиновой пробы [Текст] / В.А. Сысоев // Сб. науч. тр. Новосибирск, 1984. С. 6265.
107. Урбан В.П. Аллергическая диагностика туберкулёза крупного рогатого скота [Текст] / В.П. Урбан, М.М. Широкобокова, Г.М. Громов // Сб. науч. тр. Ленингр. вет. ин-та. 1997 Вып. 48. С. 6872.
108. Совершенствование симультальной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ [Текст] / Н.П. Овдиенко [и др.] // Тез. докл. науч.-практ. конф., Новосибирск, 12-13 июля 1995г. / РАСХН. Сиб. отд. ИЭВС и ДВ. Новосибирск, 1995. C. 4445.
109. Найманов А.Х. Морфологическая характеристика местной реакции на внутрикожное введение различных туберкулинов у больных туберкулёзом и сенсибилизированных атипичными микобактериями коров [Текст] / А.Х. Найманов, Н.П. Овдиенко, В.А. Шубин // Тез. докл. науч.-практ. конф., Новосибирск, 12-13 июля, 1995. / РАСХН. Сиб. отд. ИЭВС и ДВ. Новосибирск, 1995. С. 5051.
110. Schliesser T. Tuberculose bei Hausund Wildtierren [Text] / T.Schliesser // Pxax. Pneum. 1974. Vol. 28, № 9. P. 511514.
111. Roder K. Ur sachtn der unspezifischen Tuberculin reaction [Text] / K.Roder // Tierarztl. Umschan. 1963. № 7. S. 343344.
112. Шличин И.В. Анергия у крупного рогатого скота при туберкулёзе [Текст] / И.В. Шличин, Э.Д. Лакман // Науч. тр. Омского вет. ин-та Омск, 1978. Т.35, Вип. 3. С. 136-139.
113. Jall J.M. Role of saprophytic acidfast organisms in causing non specific sensitivization to tuberculin [Text] / J.M. Jall // Indian J. Anim. Sc. 1969. Vol. 39, № 1. P. 5968.
114. Найманов А.Х. Влияние частоты внутрикожного введения туберкулина на проявление аллергических реакций у здорового и больного туберкулёзом крупного рогатого скота [Текст] / А.Х. Найманов, Н.П.Овдиенко, Л.Н. Черноусова // Тез. докл. науч.-практ. конф., Новосибирск, 1213 июля, 1995 г. / РАСХН Сиб. отд. ИЭВС и ДВ. Новосибирск, 1995. C. 4749.
115. Шаров А.Н. Аллергическая диагностика туберкулёза животных: повышение её эффективности [Текст] / А.Н.Шаров : автореф. дис... д-ра вет. наук / ВНИИЭВ. М., 1987. 37 с.
116. Кокурьев П.И. Гнойные процессы и реакции на туберкулин у животных [Текст] / П.И. Кокурьев, С.Ф. Сахаров // Болезни сельскохозяйственных животных и птиц, их профилактика и лечение : сб. работ Ленинградского вет. ин-та. Л., 1973. Вып. 34. C. 3437.
117. Александров Н.А. К вопросу о природе атипичных микобактерий и их возможной роли в возникновении парааллергических реакций на туберкулин [Текст] / Н.А. Александров // Труды Саратовской НИВС. Саратов, 1974. Т. 9. С. 3846.
118.