Влияние T-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR-T) на клетки солидных опухолей Валиуллина Айгуль Хабибулловна

Краткое описание

Валиуллина,АйгульХабибулловна.ВлияниеT-клетоксхимернымантигеннымрецептором(CAR-T)наклеткисолидныхопухолей: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.04 /ВалиуллинаАйгульХабибулловна; [Место защиты: ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»]. - Казань, 2022. - 199 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
рукописиВалиуллинаАйгульХабибулловнаВлияниеT­клеток схимернымантигеннымрецептором(CAR­T) наклеткисолидныхопухолей03.01.04 Биохимия ДИССЕРТАЦИЯ

стр. 33
CAR­T­клеток; 5 контроль качества конечного продукта; 6 инфузия CAR­T­клеток в организм пациента 34 1.2Солидныеопухолии их взаимодействие с CAR­T­клетками 1.2.1 Строениесолидныхопухолейи применение CAR­T терапии присолидныхопухоляхСолидныеопухолипредставляют собой сложные и неоднородные органоподобные

стр. 164
полиакриламидный гель РНК рибонуклеиновая кислота CMA антиген созревания В­клеток СЦШ синдром цитокинового шторма ТКР Т­клеточныйрецепторТНБК тринитробензолсульфиновая кислота ФАБ фибробласт активационный белок ХЛЛ хронический лимфолейкоз Ang ангиотензинCARхимерныйантигенныйрецепторCAR­T Т­клетки, экспрессирующиехимерныйантигенныйрецепторCAAR химерныйрецептораутоантитела DPBS (англ....

Оглавление диссертациикандидат наук Валиуллина Айгуль Хабибулловна
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 CAR-T-клетки
1.1.1 Общее представление о CAR-T-клетках
1.1.2 Строение CAR рецептора
1.1.3 Поколения CAR рецепторов
1.1.4 Процесс получения CAR-T-клеток
1.2 Солидные опухоли и их взаимодействие с CAR-T-клетками
1.2.1 Строение солидных опухолей и применение CAR-T терапии при солидных опухолях
1.2.2 Клинические испытания CAR-T-клеток для терапии солидных опухолей
1.3 Применение CAR-T терапии
1.3.1 Применение CAR-T терапии при злокачественных гематологических новообразованиях
1.3.2 Применение CAR-T-клеток для эрадикации очагов ВИЧ-инфекции
1.3.3 Иммунотерапия CARdiac для лечения фиброза сердца
1.3.4 CAR-T терапия для лечения грибковой инфекции
1.4 Проблемы современного применения CAR-T-клеток
1.4.1 Синдром цитокинового шторма (СЦШ)
1.4.1.1 Патогенез СЦШ
1.4.1.2 Клинические проявления СЦШ
1.4.2 Нейротоксичность при CAR-T терапии
1.4.2.1 Патогенез и прогноз течения нейротоксичности
1.4.2.2 Клиническая диагностика и оценка нейротоксичности
1.4.3 Потеря антигена
1.5 Перспективы применения CAR-T-клеток при солидных опухолях
1.6 Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Получение CAR-T-клеток
2.1.1 Создание лентивирусных конструкций
2.1.2 Бактериальная трансформация
2.1.3 Выделение плазмидной ДНК
2.1.4 Трансфекция HEK293FT и наработка лентивируса
2.1.5 Определение титра вируса
2.1.6 Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови человека
2.1.7 Магнитная сепарация и активация Т-лимфоцитов
2.1.8 Вирусная трансдукция T-лимфоцитов
2.1.9 Фенотипирование CAR-T-клеток
2.2 Вестерн-блот анализ уровня экспрессии СD3Z-цепи в CAR-T-клетках
2.2.1 Выделение общей белковой фракции
2.2.2 Определение концентрации белка по методу с бицинхониновой кислотой
2.2.3 Вестерн-блот анализ
2.3 Получение клеточных линий солидных опухолей, стабильно экспрессирующих CD19 и/или красный флуоресцентный белок Katushka2S
2.3.1 Получение лентивирусных частиц
2.3.2 Трансдукция клеток
2.4 Оценка эффективности CAR-T-клеток
2.4.1 Оценка цитотоксичности CAR-T-клеток в отношении клеток солидных опухолей, экспрессирующих CD19, с помощью MTS-теста
2.4.2 Оценка влияния CAR-T-клеток на пролиферативную активность клеток солидных опухолей, экспрессирующих CD19, c применением биосенсорного клеточного анализатора xCelligence
2.4.3 Оценка эффективности CAR-T-клеток против 2D-культур опухолевых клеток (монослой)
2.4.4 Оценка эффективности CAR-T-клеток против 3D-культур опухолевых клеток
2.4.5 In vivo исследование эффективности CAR-T терапии на модели ксенографтной опухоли предстательной железы PC-3M(Kat+CD19+)
2.5 Ко-культивирование активированных макрофагов и T-ZCAR-T-клеток
2.5.1 Получение моноцитов и их дифференцировка в макрофаги
2.5.2 Ко-культивирование макрофагов с T- и CAR-T-клетками
2.6 Анализ содержания цитокинов и хемокинов
2.7 Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Получение CAR-T-клеток
3.1.1 Создание конструкции CD19-CAR-T2A-GFP-RIAD
3.1.2 Получение и фенотипирование CAR-T-клеток
3.1.3 Вестерн-блот анализ уровня экспрессии CD3Z-цепи в CAR-T-клетках
3.2 Получение клеточных линий солидных опухолей, стабильно экспрессирующих красный флуоресцентный белок Katushka и антиген СD19
3.3 Оценка эффективности CAR-T-клеток
3.3.1 Анализ противоопухолевой цитотоксичности CAR-T-клеток с помощью MTS-теста
3.3.2 Мониторинг эффектор-опосредованного цитолиза опухолевых клеток, экспрессирующих антиген CD19, с использованием клеточного анализатора в реальном времени xCelligence
3.3.3 Оценка эффективности CAR-T-клеток против 2D-культур опухолевых клеточных линий
3.3.4 Оценка эффективности CAR-T-клеток против 3D-культур опухолевых клеточных линий
3.3.5 In vivo исследование эффективности CAR-T терапии на модели ксенографтной опухоли предстательной железы PC-3M(Kat+CD19+)
3.4 Ко-культивирование активированных макрофагов и T-ZCAR-T-клеток
3.4.1 Фенотипирование моноцитов и макрофагов
3.4.2 Ко-культивирование макрофагов М1 и М2 с CAR-T-клетками в присутствии опухолевых клеток PC-3M(Kat+CD 19+)
3.5 Мультиплексный анализ
3.5.1 Мультиплексный анализ содержания цитокинов и хемокинов в культуральной среде при ко-культивировании CAR-T-клеток с 2D-культурами опухолевых линий
3.5.2 Мультиплексный анализ содержания цитокинов и хемокинов в культуральной среде при ко-культивировании CAR-T-клеток с 3D-культурами опухолевых клеточных линий
3.5.3 Мультиплексный анализ содержания цитокинов и хемокинов в культуральной среде при ко-культивировании макрофагов, CAR-T-клеток и 2D культурой опухолевой клеточной линии PC-3M(CD19+Kat+)
3.5.4 Мультиплексный анализ содержания цитокинов и хемокинов в сыворотке крови мышей при in vivo исследовании эффективности CAR-T терапии на ксенографтной модели опухоли предстательной железы PC-3M(Kat+CD19+)
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ