Выделение, очистка и свойства бета-амилазы Bacillus Polymyxa N 3 Рашап, Рима Куснельевна

Краткое описание

Рашап,РимаКуснельевна.Выделение,очисткаисвойствабета-амилазыBacillusPolymyxaN3: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Вильнюс, 1984. - 112 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ "ФЕРМЕНТ" на правах рукописи УДК 577.152.321+577.15.088+577.151РАШАПРИМАKyCHEJJbEBHAВЫДЕЛЕНИЕ,ОЧИСТКАИСВОЙСТВА5-АМИЛАЗЫBACILLUSPOLYMYZA Ж 3 специальность 03.00.04 - биохимия (}^^ Д и с с е р т а ц и я на соискание ученой степени кандидата биологических наук

стр. 2
-амилазы2.Выделениеиочисткабактериальной ь-амилазы3. Методы, основанные на специфической сорбцииамилазкрахмалом 4. .Физико-химическиесвойствабактериальных &-амилаз5. Возможности практического применения ^-амилазыГЛАВА П . ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 1. КультивированиеBacilluspolymyxaЛ 3 2.Очистка&-амилазы2.1. Получение технического препарата «.-амилазы2.2. Получение...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Рашап, Рима Куснельевна
СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ б
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Продуценты j> -амилазы
2. Выделение и очистка бактериальной р -амилазы
3. Методы, основанные на специфической сорбции амилаз крахмалом
4. .Физико-химические свойства бактериальныхуй,-амилаз
5. Возможности практического применения Д-амилазы
ГЛАВА II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Культивирование Bacillus polymyxa И
2. Очистка ^>-амилазы
2.1. Получение технического препарата д-амилазы
2.2. Получение высокоочищенного4 препарата уь-амилазы
2.2.1. Разработка состава сорбента
2.2.2. Разработка условий сорбции-десорбции а) сорбционная емкость кукурузного крахмала б) геометрия колонки в) температура сорбции и десорбции г) условия десорбции: рН и концентрация NaCl в растворе
2.2.3. Очистка ^.-амилазы методом специфической сорбции на крахмале
2.2.4. Очистка ^-амилазы методом осаждения комплекса фермент-субстрат
2.2.5. Обессоливание растворов уь-амилазы методом гель-фильтрации
2.2.6. Концентрирование растворовуа>-амилазы
2.2.7. Изоэлектрическое фокусирование
3. Анализ продуктов гидролиза крахмала
3.1. Бумажная хроматография
3.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография
4. Методы определения ферментативной активности
4.1. Определение амилолитической активности
4.2. Определение протеолитическбй активности
5. Определение концентрации белка
6. Изучение свойств ^-амилазы
6.1. Определение молекулярной массы
6.1.1. Диск-электрофорез в присутствии додецил-сульфата натрия а) окрашивание гликопротеидов
6.1.2. Седиментационный анализ
6.2. Определение аминокислотного состава
6.3. Определение карбогидратов
6.4. Изучение зависимости активности д-амилазы от рН и температуры
6.5. Изучение стабильности д-амилазы
6.6. Определение Км эфф
6.7. Изучение субстратной специфичности
7. Реагенты
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Получение технического препарата Д-амилазы.
2. Получение высокоочищенного препарата
2.1. Разработка состава сорбента
2.2. Условия сорбции-десорбции-Д-амилазы
2.3. Очистка бактериальной уь-амилазы
2.4. Изоэлектрическое фокусирование
3. Свойства изоформ Д-амилазы 70 3.1. Гомогенность и молекулярная масса
3.2. Аминокислотный состав
3.3. Углеводный состав
3.4. Влияние рН на активность и стабильность
3.5. Влияние температуры на активность и стабильность
3.6. Субстратная специфичность и продукты гидролиза 81 ВЫВОДЫ 88 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СОКРАЩЕНИЯ
ПА - протеолитическая активность
ДЭАЭ-целлюлоза - диэтиламиноэтилцеллюлоза
280 ~ поглощение света образцом при длине волны 280 нм эфф ~ эФФективная константа Михаэлиса кин - константа скорости инактивации
V - начальная скорость реакции pi - изоэлектрическая точка трис - 2-амино-2-гидроксиметилпропан -1,3 - диол КМ - карбоксиметил