Фоторецепторный аннексин А4: обнаружение, локализация и функциональные характеристики Зерний, Евгений Юрьевич

Краткое описание

Зерний, Евгений Юрьевич.
Фоторецепторный аннексин А4: обнаружение, локализация и функциональные характеристики : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10. - Москва, 2004. - 147 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Зерний, Евгений Юрьевич
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
АННЕКСИНЫ - СЕМЕЙСТВО Са27ФОСФОЛИПИДСВЯЗЫВАЮ-ЩИХ БЕЛКОВ».
1. Са2+-связывающие белки в регуляции зрительной трансдукции.
1.1. Общая схема зрительной трансдукции.
1.2. Регуляция зрительной трансдукции.
2. Структура и общие свойства аннексинов.
2.1. Номенклатура.
2.2. Тканевая и внутриклеточная локализация.
2.3. Гены и первичная структура.
2.4. Вторичная и третичная структуры.
2.5. Димеризация и четвертичная структура.
2.6. Связывание с мембранами и агрегация клеточных мембран.
2.7. Взаимодействие с лигандами нелипидной природы.
3. Функциональная активность аннексинов.
3.1. Участие в транспорте и организации клеточных мембран.
3.2. Регуляция проводимости и образование ионных каналов.
3.3. Участие в клеточной пролиферации и дифференцировке.
3.4. Аннексины в крови и межклеточном пространстве.
4. Аннексинопатии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Реактивы.
2. Выделение НСП из сетчаток быка и получение экстракта НСП.
3. Очистка аннексина А4 (р32) из НСП и печени быка.
4. Получение отмытых мочевиной фоторецепторных мембран.
5. Получение поликлональных моноспецифических антител против ан-нексина А4 из печени быка.
6. Получение фракции белков НСП, способных Са -зависимым образом взаимодействовать с иммобилизованным аннексином А4.
7. Определение концентрации белков.
8. БОЗ-электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ).
9. Иммуноблотгинг.
10. Масспктрометрический анализ белковых препаратов.
11. Иммунофлуоресцентное окрашивание срезов сетчатки и печени.
12. Связывание аннексина А4 с отмытыми мочевиной фоторецепторны-ми мембранами.
13. Агрегация отмытых мочевиной фоторецепторных мембран в присутствии аннексина А4.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Выделение и очистка фоторецепторного белка р32 и его идентификация как аннексина А4.
1.1. Получение и характеристика фракции фоторецепторных "Са -зависимых" белков.
1.2. Выделение и очистка фоторецепторного белка с кажущейся молекулярной массой 32 кДа (р32).
1.3. Доказательство способности гомогенного р32 взаимодействовать с фоторецепторными мембранами Са -зависимым образом.
1.4. Идентификация р32 как аннексина А4.
1.5. Изучение локализации аннексина А4 в сетчатке быка.
2. Изучение функциональных свойств фоторецепторного аннексина А
2.1. Взаимодействие аннексина А4 с фоторецепторными мембранами
2.1.1. Са -зависимое связывание аннексина А4 с фоторецепторными мембранами.
2.1.2. Ъгс -зависимое связывание аннексина А4 с фоторецепторными мембранами.
2.2. Аннексии А4-зависимая агрегация фоторецепторных мембран.
2.2.1. Аннексии А4-зависимая агрегация фоторецепторных мембран в присутствии ионов кальция.
2.2.2. Аннексии А4-зависимая агрегация фоторецепторных мембран в присутствии ионов цинка.
3. Поиск потенциальной белковой мишени (мишеней) для аннексина А4 в фоторецепторной клетке.
3.1. Выявление растворимых белков НСП, связывающихся с иммобилизованным аннексином А4 Са -зависимым образом.
3.2. Идентификация потенциальных белковых мишеней аннексина А
ВЫВОДЫ.