Роль матриксного белка фибулина-5 в регуляции функциональных свойств урокиназы Капустин, Александр Николаевич

Краткое описание

Капустин,АлександрНиколаевич.Рольматриксногобелкафибулина-5врегуляциифункциональныхсвойствурокиназы: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 2005. - 139 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
••? •• о ФГУ "РОССИЙСКИЙ КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ КОМПЛЕКС" РОСЗДРАВА На правах рукописиКапустинАлександрНиколаевичРольматриксногобелкафибулина-5 врегуляции03.00.04-Биохимия диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических

стр. 2
2 ОГЛАВЛЕНИЕ ОПЛАВЛЕНИЕ 2 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4 ВВЕДЕНИЕ 6 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9 Глава! Структура и функцииурокиназы9 Структураурокиназы9 Функцииурокиназы10 Глава IIРегуляцияактивностиурокиназы16Регуляцияэкспрессииурокиназы16 Посттрансляционные модификацииурокиназы17Белки-регуляторы протеолитической

стр. 3
урокиназы90 ОБСУЖДЕНИЕ 94 1. Взаимодействиеурокиназыс интегрин-связывающимибелкомфибулином-5 94 2.Фибулин-5 участвует врегуляциипротеолитической активностиурокиназы97 3.Фибулин-5 является ингибитором хемотактическихсвойствурокиназы100 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 102 ВЫВОДЫ 103 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 104 СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Капустин, Александр Николаевич
СПИСОК СОКР АЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
Глава I. Структура и функции урокиназы.
Структура урокиназы.
Функции урокиназы.
Глава II. Регуляция активности урокиназы.
Регуляция экспрессии урокиназы.
Посттрансляционные модификации урокиназы.
Белки-регуляторы протеолитической и сигнальной функции урокиназы.
Глава Ш Фибулин-5 - новый регулятор ремоделирования сосудов и тканей.
Структурная организация семейства фибулинов.
Структура и функции фибулина-5.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Химические реактивы.
Культуральные среды и пластик.
Антитела.
Рекомбинантная урокиназа.
Рекомбинантный фибулин-5.
Определение концентрации белка в пробах.
Иммобилизация белков.
Аффинная хроматография белков, связывающихся. с урокиназой без «ростового» домена.
Секвенирование белков.
Приготовление вектора pCMV-FBLN5.
Сайт-направленный мутагенез.
Получение химически компетентных клеток E.coli.
Выделение плазмидной ДНК из Е. coli.
Культивирование и трансфекция культуры клеток.
Аффинная хроматография и иммунопреципитация фибулина-5 из кондиционных сред трансфецированных клеток линии СНО и НЕК293.
Иммуноцитохимическое окрашивание клеток.
Биотинилирование урокиназы.
ДСН-электрофорез.
Иммуноблотгинг.
Лигандный блоттинг.
Получение общего клеточного лизата.
Измерение активности урокиназы.
Зимография урокиназы.
Твердофазный анализ связывания белков.
Количественный метод обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции в реальном времени.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
1. Выделение и идентификация белков, связывающих урокиназу.
1-1. Поиск белка, связывающего урокиназу без «ростового» домена.
1-2. Идентификация белка с кажущейся молекулярной массой 65 кДа методом масс-спектрометрии.
2. Взаимодействие урокиназы и белка внеклеточного матрикса фибулина-5.
2.1. Клонирование кДНК фибулина-5 и его экспрессия в клетках СНО.
2.2 Прямое взаимодействие урокиназы и фибулина-5.
2.3 Взаимодействие фибулина-5 с урокиназой на клеточной поверхности.
2.4. Доменная специфичность взаимодействия урокиназы и фибулина-5.
2.6 Фибулин-5 как возможный протеолитический субстрат урокиназы.
3. Влияние фибулина-5 на протеолитическую активность урокиназы.
3.1 Влияние фибулина-5 на амидолитическую активность урокиназы и скорость активации плазминогена.
3.2 Влияние фибулина-5 на активность урокиназы в клетках и тканях легкого.
3.4. Влияние фибулина-5 на подавление активности урокиназы под действием РА1-1.
4. Влияние фибулина-5 на хемотактические свойства урокиназы.
ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Взаимодействие урокиназы с интегрин-связывающими белком фибулином-5.
2. Фибулин-5 участвует в регуляции протеолитической активности урокиназы.
3. Фибулин-5 является ингибитором хемотактических свойств урокиназы.