Влияние гидрокортизона на синтез мРНК, кодирующей тирозинаминотрансферазу в печени крыс Блинова, Наталия Николаевна

Краткое описание

Блинова,НаталияНиколаевна.ВлияниегидрокортизонанасинтезмРНК,кодирующейтирозинаминотрансферазувпеченикрыс: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Новосибирск, 1984. - 199 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Министров СССР УДК 577.17 : 577.155.2БлиноваНаталияНиколаевнаВЛИЯНИЕГИДРОКОРТИЗОНАНАСИНТЕЗмРНК, К О Д И Р У И ЩТИРОЗИНАМИНОТРАНСФЕРАЗУВПЕЧЕНИКРЫС03.00.04 - Биологическая химия Диссертация на соискание ученой степени кадцвдата биологических наук 1^ (^jj-^ Научный руководитель д.б.н. Н.П.Мертвецов

стр. 9
интшстных и иццуцированныхгидрокортизономкрыс. Впер- -10 вые, методом молекулярной гибридизации показано, что через 4 часа после индукциигидрокортизономв клеткахпеченикрыссодержаниемРНКТАТ возрастает в 3-4 раза, а через 16 часов возвращается к ис­ ходному уровню. Таким образом, в настоящей работе

стр. 144
о колртчественном контроле его экспрессии. Приме­ ром такого рода может служить изменениесинтезаТАТпеченикрыспод действиемгидрокортизона. До настоящего временивлияниеглюкокортикоидов на процессы накоплениямРНКв полирибосомах, изменениесинтезаи распада этих мИ1К, изменение их функциональной

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Блинова, Наталия Николаевна
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. II
1.1. Общие механизмы действия стероидных гормонов как индукторов синтеза бежа в тканях-мишенях. П
1.1.1. Ферментативная индукция как механизм регуляции жизнедеятельности организмов
1.1.2. Механизмы рецепции стероидных гормонов в клетках-мишенях животных.
1.1.3. Механизмы гормональной индукции ферментов в тканях-мишенях. Использование специфических комплементарных ДНК (кДНК) для исследования синтеза и деградации матричных РНК при гормональной индукции.
1.2. Влияние глюкокортикоидов на состояние белок-синтезиру-ющего аппарата.
1.2.1. Действие глюкокортикоидов на содержание различных видов РНК в клетках-мишенях и на процесс транскрипции
1.2.2. Влияние глюкокортикоидов на посттранскрипционную модификацию РНК и на полисомный аппарат кле-тск.-мишеней
1.2.3. Действие глюкокортикоидов на процессы деградации мРНК. 40'
1.3. Тирозинаминотрансфераза (ТАТ) печени крыс как модель для исследования механизмов глюкокортикоидной индукции ферментов
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы и реактивы, использованные в экспериментах.
2.2. Характеристика подопытных, животных. Введение гормонального индуктора.
2.3. Хроматографические методы фракционирования белков из печени крыс
2.4. Определение активности ТАТ
2.5. Аналитический электрофорез белков в полиакрилашдном Стр. геле (ПААГ)
2.6. Получение моноспецифических антител к ТАТ.
2.6.1. Иммунизация кроликов очищенной тирозинамино-трансферазой . 5g
2.6.2. Выделение суммарной )j -глобулиновой фращин из сыворотки кроликов, иммунизированных ТАТ.
2.7. Приготовление "вторых" антител ( Ij козла против Icj кролика)
2.8. Методы иммунохимического анализа антител и очищенных белков
2.8.1. Двойная иммунодиффузия в агаровом геле по Оуктерлони
2.8.2. Аналитический иммуноэлектрофорез в агаровом
2.8.3. Выявление специфической активности ТАТ в имму-нопреципитатах.
2.8.4. Радиоактивное мечение jf -глобулинов кролика, специфичных к ТАТ.
2.9. Получение иммуносорбентов для фракционирования полирибосом
2.10. Выделение суммарных полирибосом из печени крыс
2.11. Седиментационный анализ полирибосом
2.12. Приготовление поли-У сефарозы 4В.
2.13. Выделение поли-А содержащей мРНК из полирибосом печени крыс путем аффинной хроматографии на поли-У сефарозе 4В.
2.14. Определение удельной радиоактивности полисомной поли-А содержащей РНК.
2.15. Определение удельной радиоактивности пула уридиновых нуклеотидов в печени крыс
2.16. Седиментационный анализ РНК в градиенте плотности сахарозы
2.17. Электрофоретический анализ препаратов РНК в агароз- Стр. ных гелях.
2.18. Получение бесклеточной белок-синтезирущей системы (экстракта S 30) из зародышей пшеницы.
2.19. Трансляция полисомной поли-А содержащей РНК в бесклеточной системе из зародышей пшеницы
2Л9.1. Электрофоретический анализ продуктов трансляции
2.19.2. Иммунопреципитация продуктов трансляции
2.20. Выделение специфической мРНК ТАТ из печени крыс
2.21. Синтез комплементарной ДНК на мРНК ТАТ.
2.22. Центрифугирование кДНК в щелочном градиенте плотности сахарозы.
2.23. Электрофорез препаратов кДНК в агарозных гелях с мочевиной
2.24. Гибридизация кДНК ТАТ с суммарной поли-А содержащей
РНК, выделенной из полирибосом печени крыс
ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПШШНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Выделение и очистка анодного изофермента ТАТ из печени крыс
3.2. Получение специфических гипериммунных сывороток к анодному изоферменту ТАТ; очистка ft -глобулинов
3.3. Влияние гидрокортизона на метаболизм и матричную активность полисомной поли-А содержащей РНК в печени
3.3.1. Результаты седиментационного анализа полирибосом, выделенных из печени интактных и индуцированных гидрокортизоном крыс
3.3.2. Выделение суммарной поли-А содержащей РНК из полирибосом печени крыс. Изменение содержания меченой поли-А содержащей РНК в полирибосомах печени при введении гидрокортизона
3.3.3. Характеристика удельной радиоактивности пула уридиновых нуклеотидов в печени крыс при введении гидрокортизона
3.3.4. Изменения удельной радиоактивности полисомной поли-А+ РНК в динамике индукции гидрокортизоном
3.3.5. Включение предшественников в полисомнуто по-ли-А содержащую РНК печени в норме и при индукции гидрокортизоном.
3.3.6. Изменения трансляционной активности полисом-ной поли-А содержащей РНК под действием гидрокортизона . НО
3.4. Определение синтеза специфического продукта, осаждаемого антителами к ТАТ, при трансляции in vitro поли-А содержащей РНК из полирибосом печени интактных и индуцированных животных.
3.5. Выделение специфической мРНК ТАТ из печени крыс и исследование полученного препарата
3.5.1. Выявление фракции полирибосом печени, синтезирующих ТАТ.
3.5.2. Выделение специфической мРНК ТАТ из полирибосом печени крыс
3.5.3. Определение размеров мРНК ТАТ методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы . jqq
3.5.4. Измерение матричной активности препаратов мРНК ТАТ в бесклеточной системе синтеза белка
3.5.5. Исследование матричных свойств мРНК ТАТ в системе обратной транскрипции. Анализ размеров полученной комплементарной ДНК
3.6. Сравнение концентрации мРНК ТАТ в клетках печени крыс в динамике индукции гидрокортизоном методом гибридизации суммарной поли-А содержащей РНК с высокомеченой кДНК ТАТ.
ГЛАВА Г/. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
Выводы.